论文部分内容阅读
目的:甲状腺癌在临床内分泌系统恶性肿瘤中最为常见,其中甲状腺乳头状癌此种病理类型又在甲状腺癌中占比最多。近年来研究表明,甲状腺乳头状癌发生发展可能与表观遗传学改变有关。另外有研究表明,碘营养异常对甲状腺乳头状癌细胞系的影响较正常甲状腺细胞更为显著,碘营养水平尤其是高碘也在一定程度上影响甲状腺癌细胞基因水平的改变,但是高碘与甲状腺乳头状癌表观遗传学改变之间的关系仍不明确,因此,高碘是否可通过促进甲状腺表观遗传学改变促进甲状腺癌发展需要探讨。本研究通过分析甲状腺乳头状癌细胞系中TSHR、NIS启动子甲基化和基因表达情况,分析甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭能力变化与高碘是否影响关键基因甲基化有关。方法:本研究通过剂量筛选,确定乳头状癌细胞系TPC-1经不同浓度碘化钾做高碘处理后,细胞增殖能力较强的处理剂量;甲基化抑制剂DAC配成相应浓度溶液,和筛选出的高碘剂量共同处理甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1;细胞消化重悬后分成4组,分别为PBS溶剂对照组、10-3 mmol/L KI处理组、5μmol/L DAC对照组、10-3mmol/L KI+5μmol/L DAC干预组。置于37℃CO2浓度5%细胞培养箱进行培养。应用CCK-8实验检测细胞增殖能力,划痕实验评价分组细胞划痕愈合能力,Transwell侵袭实验探究不同处理组的细胞侵袭能力是否存在差异;运用甲基化特异性PCR（MSP）检测不同处理组中TSHR、NIS基因启动子甲基化的情况;从细胞中提取总RNA,逆转录成为c DNA,凝胶电泳定性探究TSHR、NIS基因完整性情况,实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测TSHR、NIS m RNA相对表达水平。结果:（1）经CCK-8细胞增殖实验筛选,10-3 mmol/L KI处理剂量组细胞增殖能力较各染毒组均增强,差异有统计学意义（P<0.05）;而10-3 mmol/L KI+5μmol/L DCA处理组细胞运动转移能力、侵袭能力降低,与单纯KI处理组相比下降,差异有统计学意义（P<0.05）,5μmol/L DCA组细胞增殖能力、运动转移能力与PBS溶剂对照组相比,差异没有统计学意义。（2）本次实验中溶剂对照组TSHR、NIS基因均发生了启动子区DNA甲基化,表明在该甲状腺乳头状癌细胞系中原本存在基因甲基化现象;MSP实验凝胶电泳成像图分析得出,TSHR基因经不同处理因素作用后,出现甲基化特异性扩增产物条带和非甲基化特异性扩增条带,与对照组相比,TSHR基因10-3mmol/L KI处理组甲基化特异性产物扩增条带光密度值增大,经数据分析,差异有统计学意义（P<0.05）;实时荧光定量PCR显示,溶剂对照组TSHR m RNA相对表达水平为（1.91±0.31）,10-3mmol/L KI剂量组TSHR m RNA相对表达水平为（1.15±0.34）,5μmol/L DCA处理组的TSHR m RNA相对表达水平为（2.01±0.15）,10-3 mmol/L KI+5μmol/L DCA处理组的TSHR m RNA相对表达水平为（1.80±0.54）,与对照组相比,10-3 mmol/L KI处理组TSHR m RNA表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）,甲基化抑制剂干预组TSHR m RNA相对表达水平升高,与KI处理组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）与对照组相比,NIS基因KI处理组甲基化特异性扩增条带光密度值增大,差异有统计学意义（P<0.05）,10-3 mmol/L KI+5μmol/L DAC处理组甲基化特异性扩增条带光密度值明显低于10-3 mmol/L KI处理组甲基化特异性扩增条带光密度值,差异有统计学意义（P<0.05）;实时荧光定量PCR显示,溶剂对照组NIS m RNA相对表达水平为（3.86±0.67）、10-3mmol/L KI处理组NIS m RNA相对表达水平为（2.28±1.01）,5μmol/L DCA干预组的NIS m RNA相对表达水平为（6.95±3.14）,10-3 mmol/L KI+5μmol/L DCA干预组的NIS m RNA相对表达水平为（9.81±4.62）,与KI处理组相比,甲基化抑制剂KI-DAC干预组的NIS m RNA相对表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:在甲状腺乳头状癌细胞相关基因存在甲基化的基础上,高碘可提高细胞TSHR、NIS基因甲基化程度,降低甲状腺癌细胞相关基因在甲状腺乳头状癌细胞中的相对表达水平,进而促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖、运动转移和侵袭能力;甲基化抑制剂DAC可通过抑制碘化物的促癌生长作用,抑制高碘促甲基化,部分恢复TSHR、NIS基因在甲状腺乳头状癌细胞中的表达,能够抑制甲状腺癌细胞的增殖、侵袭能力,进而减缓甲状腺乳头状癌的发展进程。