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目的：
本研究拟于大鼠脑出血模型上应用ELISA、免疫组化、RT-PCR等方法，研究破血化瘀、填精补髓法是否通过调节NF-κB信号通路减轻脑出血后的继发损伤机制，以论证破血化瘀、填精补髓法可以减轻脑出血后炎症反应和细胞凋亡，保护神经功能，促进脑组织损伤修复的假说，探索破血化瘀、填精补髓法治疗脑出血的机制。
方法：
1．选择正常Wistar雄性大鼠，体重240g～260g，随机分为假手术组、脑出血模型组（模型组）、出血性中风方剂组（方剂组）、脑血康对照组（对照组），按照自体尾动脉血注射方法制备稳定的脑出血模型。
2．通过神经行为学评分、干湿重法、HE染色法观察破血化瘀、填精补髓法对实验性脑出血大鼠的神经功能缺损、脑含水量及血肿周围脑组织病理的干预效果。
3．应用ELISA法检测脑出血血肿周围脑组织的IL-1、IL-6、TNF-α的表达变化。
4．应用免疫组化法和RT-PCR法检测NF-κB、TLR4、MyD88的蛋白表达及mRNA的变化。
结果：
1．假手术组Longa评分为0分，方剂组和对照组与模型组比较可明显降低神经功能缺损评分（P＜O.05），其中方剂组功能恢复最为明显，与对照组比较存在显著差异(P＜0.05）。
2．模型组大鼠脑含水量较假手术组增加明显（P＜0.05），方剂组和对照组脑含水量与模型组比较下降明显，其中方剂组下降更为显著，与对照组比较存在显著差异（P＜0.05）。
3．模型组与方剂组和对照组HE染色均显示脑组织病理变化明显，3d时病理较5d时改变更显著，但方剂组和对照组的脑组织破坏较模型组大鼠轻。
4．ELISA法检测3d时血肿周围脑组织中IL-1、IL-6、TNF-α含量，方剂组和对照组均低于模型组，存在显著差异（P＜0. 05），方剂组降低IL-1、IL-6、TNF-α能力与对照组比较，无显著性差异（P＞0.05）。
5．脑出血后3d，NF-κB、TLR4、MyD88的表达一致。模型组与假手术组比较，模型组阳性细胞表达最强，数目最多，着色最深，呈棕褐色；对照组与方剂组阳性细胞中等强度表达，数目较少，着色为棕黄色；假手术组阳性细胞阳性表达较弱，着色为淡黄色，数目最少。其灰度值检测，各组与模型组比较有极显著性差异（P＜0.01），方剂组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。
6．RT-PCR检测，NF-κB、TLR4、MyD88的表达一致。模型组与假手术组相比，NF-κBmRNA、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA水平明显增高（P＜0.01）；方剂组和对照组与模型组相比，NF-κB mRNA、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA水平明显降低（P＜0.05），两者之间也有差异（P＜0.05）。
结论：
1．证实破血化瘀、填精补髓法可以明显降低脑出血后脑水肿程度，减轻血肿周围损伤脑组织的炎症反应，改善神经功能缺损程度。
2．脑出血后血肿周围脑组织中IL-I、IL-6与TNF-α的表达增多，受损脑组织细胞形态的病理变化与其密切相关，破血化瘀、填精补髓法可以抑制IL-I、IL-6与TNF-α的表达，对抗脑出血后的炎症反应。
3．NF-κB、TLR4、MyD88可在脑出血后血肿周围受损脑组织中表达增多，破血化瘀、填精补髓法治疗ICH的机制可能是调节NF-κB-TLR4-MyD88信号通路抑制炎症反应和细胞凋亡而达到“解毒”目的，并且治疗由“毒损所致”的髓虚，既针对“诸毒”之标，又兼顾“髓虚”之本而发挥治疗脑出血作用。
本研究拟于大鼠脑出血模型上应用ELISA、免疫组化、RT-PCR等方法，研究破血化瘀、填精补髓法是否通过调节NF-κB信号通路减轻脑出血后的继发损伤机制，以论证破血化瘀、填精补髓法可以减轻脑出血后炎症反应和细胞凋亡，保护神经功能，促进脑组织损伤修复的假说，探索破血化瘀、填精补髓法治疗脑出血的机制。
方法：
1．选择正常Wistar雄性大鼠，体重240g～260g，随机分为假手术组、脑出血模型组（模型组）、出血性中风方剂组（方剂组）、脑血康对照组（对照组），按照自体尾动脉血注射方法制备稳定的脑出血模型。
2．通过神经行为学评分、干湿重法、HE染色法观察破血化瘀、填精补髓法对实验性脑出血大鼠的神经功能缺损、脑含水量及血肿周围脑组织病理的干预效果。
3．应用ELISA法检测脑出血血肿周围脑组织的IL-1、IL-6、TNF-α的表达变化。
4．应用免疫组化法和RT-PCR法检测NF-κB、TLR4、MyD88的蛋白表达及mRNA的变化。
结果：
1．假手术组Longa评分为0分，方剂组和对照组与模型组比较可明显降低神经功能缺损评分（P＜O.05），其中方剂组功能恢复最为明显，与对照组比较存在显著差异(P＜0.05）。
2．模型组大鼠脑含水量较假手术组增加明显（P＜0.05），方剂组和对照组脑含水量与模型组比较下降明显，其中方剂组下降更为显著，与对照组比较存在显著差异（P＜0.05）。
3．模型组与方剂组和对照组HE染色均显示脑组织病理变化明显，3d时病理较5d时改变更显著，但方剂组和对照组的脑组织破坏较模型组大鼠轻。
4．ELISA法检测3d时血肿周围脑组织中IL-1、IL-6、TNF-α含量，方剂组和对照组均低于模型组，存在显著差异（P＜0. 05），方剂组降低IL-1、IL-6、TNF-α能力与对照组比较，无显著性差异（P＞0.05）。
5．脑出血后3d，NF-κB、TLR4、MyD88的表达一致。模型组与假手术组比较，模型组阳性细胞表达最强，数目最多，着色最深，呈棕褐色；对照组与方剂组阳性细胞中等强度表达，数目较少，着色为棕黄色；假手术组阳性细胞阳性表达较弱，着色为淡黄色，数目最少。其灰度值检测，各组与模型组比较有极显著性差异（P＜0.01），方剂组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。
6．RT-PCR检测，NF-κB、TLR4、MyD88的表达一致。模型组与假手术组相比，NF-κBmRNA、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA水平明显增高（P＜0.01）；方剂组和对照组与模型组相比，NF-κB mRNA、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA水平明显降低（P＜0.05），两者之间也有差异（P＜0.05）。
结论：
1．证实破血化瘀、填精补髓法可以明显降低脑出血后脑水肿程度，减轻血肿周围损伤脑组织的炎症反应，改善神经功能缺损程度。
2．脑出血后血肿周围脑组织中IL-I、IL-6与TNF-α的表达增多，受损脑组织细胞形态的病理变化与其密切相关，破血化瘀、填精补髓法可以抑制IL-I、IL-6与TNF-α的表达，对抗脑出血后的炎症反应。
3．NF-κB、TLR4、MyD88可在脑出血后血肿周围受损脑组织中表达增多，破血化瘀、填精补髓法治疗ICH的机制可能是调节NF-κB-TLR4-MyD88信号通路抑制炎症反应和细胞凋亡而达到“解毒”目的，并且治疗由“毒损所致”的髓虚，既针对“诸毒”之标，又兼顾“髓虚”之本而发挥治疗脑出血作用。