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罗丹明B(Rhodamine B,RB),俗称花粉红,是一种具有鲜桃红色的人工合成的化工染料,具有致癌致突变作用。因具有价格低廉、色泽红艳、稳定性强等特点,常被不法分子用作辣椒粉、辣椒油及腊肠等调味品的染色剂,给人们的健康乃至社会带来了极大的危害,因此研究食品中罗丹明B的检测方法是迫切需要的。然而目前,检测食品中RB方面的文献至今未见报道,虽然RB被列为卫生部首批公布的17种违禁食品添加物质之一,但仍有违规应用。因此研究RB的快速检测与鉴定方法具有重大意义。由于RB的化学结构不易合成人工抗原,本文通过采用RB的同系物罗丹明123(Rhodamine 123,R123)合成人工抗原,制备针对RB的多克隆抗体,初步建立了检测RB的间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析分析法,两种方法都具有良好的特异性和灵敏度。利用戊二醛法将R123分别与牛血清白蛋白(bovine serμm albμmin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbμmin,OVA)进行偶联,制备出完全免疫抗原R123-BSA和包被抗原R123-OVA。将免疫原R123-BSA与弗氏佐剂等体积混匀后,采用皮下多点免疫3月龄的新西兰大耳白兔,制备RB的多克隆抗血清。多次免疫后,经测定兔子产生的抗血清效价为1:4000,采用硫酸铵盐析沉淀法纯化制得的兔抗血清,得到特异性的RB多克隆抗体。以纯化的抗体为基础,建立了RB的间接竞争酶联免疫吸附法。实验表明,在0.001 ng/ml~10000ng/ml范围内,IC50为3.96ng/ml,IC15达到了0.23 ng/ml,对罗丹明6G、苏丹红和胭脂红的交叉反应率分别为55.93%、8.82%和0.51%,表明此方法具有较高的特异性,并对方法的精密度、灵敏度等进行了评价。在样品的实际检测中,分别对枸杞、辣椒、花椒进行了检测,消除了基质影响,样品回收率测定为80.50%-110.50%,并通过高压液相色谱法(HPLC)对所建立的ELISA方法进行了比较和验证,两种方法均呈现出良好的线性关系,相关系数R2为0.9695。结果表明,所建立的间接竞争ELISA方法各项参数均能满足实际检测的需要,适合于食品中RB的免疫快速检测。建立了以胶体金标记抗体为基础的RB免疫快速检测技术,以胶体金作为示踪标记物,以硝酸纤维素膜(NC膜)为固相载体,包被R123-OVA作为检测带,包被羊抗兔Ig G作为质控带,通过优化实验条件,开发了渗滤式胶体金免疫快速检测试纸条,并研制出RB标准品浓度比色卡,RB检测范围为0.01 ng/ml~20 ng/ml,其最低检出限为0.5ng/ml。对实际样品的检测,选取枸杞、辣椒、花椒等为样品,进行了RB的定性测试。通过稀释样品提取液的方法,消除了基质影响和色素干扰,且加标回收率试验良好。该方法操作简单,结果直观,无需特殊设备即可实现现场快速检测,适合于调味品及部分食品中RB的快速定性免疫检测。