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研究背景:胃癌是一种很常见的恶性肿瘤,在我国消化道恶性肿瘤发生率中处于第一位,而死亡率在我国恶性肿瘤中也排名第三位。胃癌死亡率高的原因大多数是由于早期胃癌不容易被发现,而晚期胃癌的浸润和转移则是影响其预后的关键因素。当肿瘤形成时,肿瘤周围所处的微环境是肿瘤生长、转移和预后的一个重要因素。而这种微环境很容易使胃癌细胞处于一个缺氧的状态,引发缺氧诱导因子的表达。缺氧诱导因子在肿瘤细胞中是非常重要的转录因子,它是许多肿瘤发生发展过程中的重要基因,其中缺氧诱导因子调控micro RNA(mi RNA)的表达。有关mi RNA的报道有很多,它在肿瘤的整个形成过程,包括生长、转移、浸润、分化、凋亡等过程中都起着调控作用。我们今天来探讨胃癌AGS细胞在缺氧状态下mi R-574-3p表达。材料和方法:本文采用了胃癌细胞系AGS细胞作为研究的基础,通过用Co Cl2刺激和在缺氧培养箱的培养下来完成本实验的所有研究。实验通过不同Co Cl2的浓度来摸索最适浓度,根据不同氧气浓度来摸索最适的一种缺氧状态,分别采用最适浓度Co Cl2(200mM)和最适氧气(5%O2)来进一步研究。我们采用干扰和激活HIF-1α的表达正反两方面来研究,采用HIF-1α抑制剂和si-RNA的方法来从反面证实HIF-1α能够引起mi R-574-3p的上调,我们转染稳定表达HIF-1α的质粒,通过在常氧下稳定表达HIF-1α来看mi R-574-3p的表达情况。我们采用双荧光素酶报告系统确定HIF-1α能够直接作用于mi R-574-3p上游启动子区域。我们通过瞬转mi R-574-3p看AGS细胞内HIF-1α的表达情况。结果:首先我们利用在环境中缺氧和氯化钴模拟缺氧的状态下发现mi R-574-3p的表达增加,在氯化钴刺激下,三次的统计结果分析:mi R-574-3p表达量增加了2.18倍;而在缺氧状态下,三次的统计结果分析:mi R-574-3p表达量增加了1.93倍;为了进一步证实mi R-574-3p的增加是由HIF-1α引起的,我们采用了抑制剂和si-RNA通过阻断HIF-1α的表达来证实此问题。三次结果分析:在氯化钴和缺氧状态下抑制剂分别降低约40%和29%,而在氯化钴和缺氧状态下si-RNA分别降低约30%和36%。而且我们还采用了转染HIF-1α的质粒,我们发现转染质粒后mi R-574-3p的表达量增加了2.15倍;我们试用双荧光素酶报告系统检测后,HIF-1α直接mi R-574-3p上游约1000bp的启动子区域结合。我们瞬转mi R-574-3p质粒会引起HIF-1α的表达增加1.3倍。结论:研究表明缺氧条件下通过HIF-1α能够上调胃癌AGS细胞的mi R-574-3p表达,并且HIF-1α直接作用于mi R-574-3p上游启动子区域,mi R-574-3p表达的增加可以上调HIF-1α的表达量,缺氧上调mi R-574-3p的表达可能对缺氧激活的HIF/VEGF通路有正反馈调控作用。