丝光绿蝇线粒体基因遗传多样性分析及其在法医死亡地点推测中的探究

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目的:对中国多地丝光绿蝇线粒体基因进行测序和分析,填补该领域国内的信息空白,并探究地理隔离对中国丝光绿蝇线粒体基因遗传多样性的影响,及其在法医学死亡地点推测中的应用。方法:采用PCR扩增及第一代测序相结合的方式,对采集自中国各地的、地理距离相差较大的丝光绿蝇群体样本进行线粒体DNA提取和部分基因测序,分析其线粒体DNA的遗传多样性和种群遗传结构,并试图寻找与地域相关的遗传信息差异,并进一步通过法医学验证将地理种群的分化研究与第一案发现场的推断结合起来。运用MEGA 6.0进行碱基组成成分分析、系统发育分析、遗传距离分析以及具有地域特征SNP位点的统计,运用Primer5进行PCA聚类分析和Cluster聚类分析,运用WinArl35软件进行地域间的遗传分化研究,运用DNAsp 5.0分别对各基因和各地区的遗传多样性以及具有地域特征的单倍型进行分析,运用Network进行网络单倍型结构分析,运用SPSS进行数据整理。结果:本实验对中国9个省份11个地区的55只丝光绿蝇样本的线粒体DNA部分基因进行了测序工作,测序长度6889bp,测序部分包括7个基因和14个转运RNA。11个地区样本平均碱基含量为:36.49(A),38.11(T),14.17(C),11.21(G),具有较高的AT偏向性。蛋白质编码区除COX1起始密码子为TCG外其余均为ATG,COX1、COX2、ND5编码区终止密码子为3’A残留物,其余均为TAA。11各地区样本总体核苷酸多态度(Pi)为0.191%,多态位点数(S)为150,单倍型多态度(Hd)为0.995,平均遗传距离最大的2个基因为COX3和ND5,ATP8基因最保守。按地区来看,江苏盐城和海南海口的核苷酸多态度最高,分别为0.00351和0.00270,甘肃平凉地区最低。Tajima’sD检验及Fu’sFs检验表明大部分地区的突变受环境因素影响较大。聚类分析结果显示55个样本分为2类,分别代表2个亚种。系统发育分析显示11个地区种群之间属于平行进化关系,并无进化的先后之分。11个种群群体内总体遗传分化系数Fst=0.13500,其中22组具有统计学意义。单倍型分析共发现50个单倍型,其中COX3基因共发现10个具有地域特征的私有单倍型,可用作8个地区的鉴别,多重序列比对共发现14个具有地域特征的私有简约信息位点,可用作5个地区的鉴别。结论:地理隔离对中国丝光绿蝇线粒体基因的遗传多样性具有影响,这种影响可能对法医学死亡地点的推测有所帮助。
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