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背景： 2型糖尿病、代谢综合征等多种代谢性疾病已经成为严重威胁人类健康的公共卫生问题之一，其发病的病理生理学基础是胰岛素抵抗(Insulinresistance，IR)。目前研究表明，肥胖和胰岛素抵抗关系密切，肥胖引起慢性炎症反应的主要起始部位在脂肪组织中，脂肪细胞能够分泌多种细胞因子，阻碍胰岛素信号传导产生胰岛素抵抗。因此，对于肥胖的2型糖尿病胰岛素抵抗患者，通过调节糖脂的代谢，提高胰岛素信号通路的活性是防治IR的重要策略。 目前西医的治疗目的重在延缓糖尿病并发症的发展进程，通过节制饮食、降低血糖、控制血压、调节脂质代谢紊乱等方法。尽管目前治疗糖尿病的药物比较多，但各有各的不良反应。因此，寻找作用于多靶点的预防或治疗糖尿病的低毒高效药物具有重要的临床意义和广泛的社会价值。而中医药在治疗2型糖尿病方面，具有多靶点、副作用小等优势。 导师彭万年教授从事糖尿病的研究多年，参考古今文献结合自己多年的临床经验，彭师认为脾肾阳气不足是糖尿病的基本病机，痰湿瘀阻是糖尿病发生的病理产物，故治疗消渴病应补泻兼顾，标本兼治，综合治疗。通过温补脾肾、疏肝理气以达活血化瘀之功。针对2型糖尿病病机关键脾肾亏虚、痰瘀互结，创立温阳解郁方治疗2型糖尿病及其并发症，本方有理中汤健脾、真武汤温肾阳、四逆散畅枢气机，稍加活血之品。通过温阳补肾、补脾益气、疏肝理气以达活血化瘀之功。前期的研究表明本方对糖尿病肾病、糖尿病性心脏病，在延缓其发生发展的进程，改善患者的生活质量方面，均取得较好的疗效。温阳解郁方是否能改善2型糖尿病患者胰岛素抵抗状态？其改善胰岛素抵抗的作用是否通过PI3K通路而发挥作用？尚未进行过深入的探讨。 目的： 1、观察运用温阳解郁方改善2型糖尿病胰岛素抵抗的临床疗效。 2、通过温阳解郁方干预3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型，从分子生物学角度探讨其改善胰岛素抵抗的分子机制。 方法： 1、将符合2型糖尿病胰岛素抵抗诊断标准的患者80例，随机分为治疗组和对照组，均给予相同的基础治疗，对照组予西药（盐酸二甲双胍片0.5gBid或Tid，阿托伐他汀片20mg，QN），口服，治疗组在给予西药的基础上加服温阳解郁方，每日1剂。两组均连续治疗8周。评价两组胰岛素抵抗指数的变化，两组中医症候积分，并观察空腹血清胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、空腹葡萄糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、体重指数等实验室指标的变化。 2、采用胰岛素、地塞米松、异丁基甲基黄嘌呤诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，并通过油红 O染色鉴定。MTT比色法观察温阳解郁方对3T3-L1脂肪细胞活力的影响。采用高糖高胰岛素诱导胰岛素抵抗脂肪细胞模型，并通过葡萄糖摄取实验验证。将 IR3T3-L1细胞分为模型组及药物干预组（温阳解郁方高、中、低剂量组），另设对照组。收集细胞和培养液上清，采用酶标记免疫吸附测定法（Elisa）检测脂联素、脂肪酸分泌水平。免疫印迹法(WB)法检测PI3K信号通路相关信号分子蛋白表达及其磷酸化水平；荧光定量法（RT-PCR）检测相关基因的表达；通过免疫荧光法观察葡萄糖转运体4（GLUT-4）膜转位。 结果： 1、治疗组的中医证候疗效总有效率达89.7%；对照组的中医证候疗效有效率为65.8%，比较差异显著（P<0.01)，治疗组在改善患者中医证候方面明显优于对照组。2、两组患者治疗后HOMA-IR、FINS、FPG、2hPG、TC、TG、LDL-C、HbAlc、CHOL较治疗前指数下降明显，比较差异显著(P<0.01或P<0.05)。两组治疗后比较治疗组HOMA-IR、FPG、FINS、LDL-C水平改善均较对照组具有显著性差(P<0.05)；2hFPG、TC、TG、CHOL水平改善均较对照组无显著性差异(P>0.05)；提示治疗组在改善患者的HOMA-IR、FPG、HbAlc、FINS、LDL-C水平方面优于对照组。3、油红 O染色后证实90%以上3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。4、通过MTT检测24h，温阳解郁方对细胞抑制率分别为16.2%，13.8%，15.2%，18.3%，20%，48h抑制率分别是25.4%、28.7%、31.3%、36.3%、42.3%。72h抑制率达到34.6%、37.4%、39.0%、42.6%、52.3%。我们根据药物对细胞影响最小原则，选取125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml三个药物浓度观察其对胰岛素抵抗改善的影响。5、通过葡萄糖摄取实验证实，24h葡萄糖摄取分别下降45%和49%，胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞模型建立成功。6、与对照组比较，IR组FFA水平明显升高（P<0.01）；温阳解郁方（高、中、低剂量组）干预后，FFA水平逐渐下降，与IR组比较（P<0.05）。与IR组比较，温阳解郁方（高、中、低剂量组）干预后，脂连素水平明显下降（均P<0.05），中药组的脂连素水平随着中药组药物低、中、高剂量浓度的升高而升高（P<0.05），呈剂量依赖性。7、与模型组比较，各给药组中PI3K、PPARr的蛋白及基因表达量均有一定程度上调，且随着药物浓度升高程度逐渐上调（P<0.05），与药物剂量呈正相关。与IR组比较，P-IRS-1蛋白表达上调（P<0.05），与药物剂量呈正相关。非磷酸化IRS-1却成相反趋势变化。表明IRS-1总蛋白量没有发生变化。说明在此模型中温阳解郁方改变了IRS-1磷酸化状态，不是通过调节其蛋白水平。8、温阳解郁方增加胰岛素抵抗脂肪细胞模型GLUT-4从胞浆向胞膜转位。 结论： 1.温阳解郁方联合西药治疗可改善2型糖尿病胰岛素抵抗患者的胰岛素抵抗状态，其作用机理可能是通过调脂降糖，疗效优于西药组。 2.温阳解郁方呈时间及浓度依赖性增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取。 3.温阳解郁方改善胰岛素抵抗是通过PI3K通路，增加IRS蛋白磷酸化水平促进 GLUT4从胞浆向胞膜转位而实现的。 4.温阳解郁方可提高PPARr蛋白及基因表达，调节糖脂的代谢，改善胰岛素抵抗。 5.温阳解郁方通过降低脂联素水平、提高游离脂肪酸含量，减少脂肪细胞因子对胰岛素信号传递的干扰因素，从受体后水平改善胰岛素抵抗状态。