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旱稻(Oraza sativa)亦称陆稻,其作为栽培稻的一种生态类型,具有耐旱性强、需水量少的特点,被农学家誉为“中国3亿亩旱地开发的希望”,是推行节水农业、旱作农业的最佳早粮作物之一。烟酰胺合酶(NAS)基因是一种植物生长代谢中的关键酶基因,对提高植物的抗旱性具有重要作用。本实验以旱稻种子为外植体,探讨不同激素配比、培养时间、继代次数等对愈伤组织诱导和分化的影响,以期建立一个高频再生体系;同时摸索农杆菌介导烟酰胺合酶(NAS)基因转化旱稻的一些条件。主要研究结果如下:
1.不同消毒剂组合对旱稻种子消毒效果差异明显,本研究采用75%的酒精处理3分钟+2.5%的次氯酸钠50分钟的消毒组合消毒效果最好。
2.2,4-D是诱导旱稻种子产生愈伤组织的必需因子,适宜用量为2.0-2.5mg/L;与单独使用2,4-D相比较,6-BA与2,4-D配合使用对种子愈伤诱导培养效果并不明显。
3.不同激素配比对旱稻成熟胚愈伤组织的分化结果不同:6-BA、KT、NAA三种激素配比的分化率高于6-BA和NAA两种激素配比的分化率,分化率均以MS+3 mg/L6-BA+2.5mg/LKT+1.0mg/LNAA最高。
4.加入25mg/L山梨醇的分化培养基比不加山梨醇对照组的分化率均有明显提高,最高达42.76%。
5.旱稻愈伤组织的分化率随着继代次数的增加和诱导培养时间的延长而下降,以初始愈伤直接分化率最高。
6.通过不同浓度梯度实验,得到旱稻遗传转化中最佳的卡那霉素筛选压为80mg/L;含100mg/L的Cef或400mg/L的Carb筛选培养基可完全抑制农杆菌的生长。
本实验结果为旱稻耐旱基因工程提供了实验技术基础。