论文部分内容阅读
背景：丹参为活血化瘀中药，广泛用于治疗心脑血管疾病，其中丹参酮ⅡA（Tanshinone IIA, TSA）为丹参中重要的有效活性成分。研究显示丹参酮有抗肿瘤，抗菌，抗炎，抗氧化和抗凋亡等作用。最近的研究表明TSA用于脑缺血再灌注损伤大鼠，能够显著改善大鼠神经功能，减少脑梗死体积。但是其最佳使用浓度及治疗时间窗尚无统一认识，其神经保护作用的机制也不清楚。方法：采用改良Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，缺血2h，再灌注24h。将实验动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(vehicle)和缺血再灌注加不同浓度药物组。给药方式为腹腔注射，对照组给予等体积1%的二甲基亚砜。观察TSA的神经保护作用并探讨其可能机制：（1）对各组大鼠脑缺血2h后进行神经功能评分，再灌注24h后处死并测定脑梗死体积、脑含水量，观察TSA的脑保护作用及最佳给药浓度和治疗时间窗。（2）对sham组、vehicle组、25mg/kgTSA处国家自然科学基金资助(No.81070917和No.30900457)理组大鼠进行组织取材，制备石蜡切片、脑组织匀浆和提取组织蛋白，检测切片中神经元存活情况和细胞形态；用原位末端标记法（TUNEL）法检测脑组织切片中神经元的凋亡；用Western Blot测定脑组织中bcl-2、caspase-3蛋白的表达。（3）采用MPO检测中性粒细胞表达情况，ELISA检测炎症因子MIF、IL-6、TNF-α的表达，Western Blot和免疫荧光测定MIF蛋白的表达及定位，Western Blot和EMSA检测NF-κB的表达和迁移入核情况结果：（1）20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg剂量TSA处理后均可降低大鼠神经行为学评分，减少脑梗死体积和脑含水量，其中25mg/kgTSA效果最显著。25mg/kgTSA于4个不同时间点给药，都有保护作用，其中术后10分钟给药效果最佳。（2）25mg/kgTSA处理大鼠能明显改善神经元的形态和增加神经元存活数量，减少损伤脑组织切片中脑神经元TUNEL阳性细胞数量，下调caspase-3的表达，上调bcl-2的表达。(3) TSA处理可减少I/R损伤后的脑组织MPO活性，抑制MIF的表达上调，下调NF-κB活性，减少TNF-α和IL-6的释放。结论：（1）TSA处理对大鼠脑I/R损伤有保护作用，且25mg/kgTSA术后10分钟给药效果最佳。（2）TSA的脑保护作用机制可能与以下两方面因素有关：1）下调caspase-3的表达，上调bcl-2的表达，发挥其抗凋亡作用。2）抑制MIF的表达上调，下调NF-κB活性，减少TNF-α和IL-6的释放，减少I/R损伤后的脑组织MPO活性，发挥其抗炎症作用。