MARVELD1线粒体信号肽的确认及与Hsp70相互作用研究

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MARVELD1(MARVEL domain containing1)基因定位于人类10q24.2,编码mRNA全长3238bp,本实验室早期研究发现其编码的蛋白在细胞中有内源性表达,并在多种肿瘤组织中都出现了明显的表达下调。信号肽预测分析结果显示MARVELD1蛋白N-末端1-33位氨基酸可能为其线粒体定位信号肽序列。课题组前期通过胶体金免疫电镜对该蛋白的定位情况进行研究,结果显示在线粒体中存在MARVELD1蛋白的分布。本课题的研究试图通过确认MARVELD1假定线粒体信号肽与MARVELD1在线粒体中定位的关系及其相互作用的分子,深入认识MARVELD1在线粒体中的功能。本课题采用稳定表达野生型全长MARVELD1及其假定信号肽缺失截短体的肺癌细胞A549,结合免疫荧光及Western blotting分析。结果表明野生型MARVELD1存在较强的线粒体定位,而MARVELD1假定信号肽缺失截短体仍存在较弱的线粒体定位,说明该假定信号肽序列对于影响MARVELD1线粒体定位具有一定功能,但其缺失却并不能完全干扰MARVELD1进入线粒体。同时,本课题组前期采用GST-pull down结合质谱分析的方法筛选MARVELD1的相互作用分子时发现,MARVELD1与Hsp70存在潜在相互作用。基于以上结果,本课题应用Co-IP技术,在稳定表达MARVELD1或假定信号肽缺失截短体的A549细胞中检测MARVELD1与Hsp70是否存在相互作用。结果显示野生型与截短体MARVELD1均与存在于细胞质中的Hsp70存在相互作用,而与线粒体中的Hsp70家族成员mtHsp70并不存在相互作用。本研究还通过线粒体组分分离结合质谱分析技术分析了MARVELD1在线粒体中的相互作用分子,结果发现MARVELD1可能与线粒体加工肽酶存在相互作用。
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