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为制备具有低过敏性和抗氧化作用的牛乳酪蛋白活性肽乳基料粉,以水解度和·OH清除率为指标,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶中筛选出两种酶组成复合酶对牛乳酪蛋白进行深度水解,酶解物先后经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化,后经喷雾干燥制成具有低过敏性抗氧化牛乳酪蛋白活性肽乳基料粉,试验获得以下研究结果。(1)胰蛋白酶和中性蛋白酶酶解物具有较高的水解度和较好的·OH清除率,通过单因素和正交试验得出复合酶最佳酶解条件:胰蛋白酶和中性蛋白酶加酶量分别为2500U/g和3000U/g,在pH7.5,55℃温度下酶解5h。与单酶酶解物相比,复合酶酶解物水解度、多肽含量、·OH清除率和DPPH·清除率分别提升了60.05%、49.31%、24.08%、23.87%。(2)牛乳酪蛋白经复合酶酶解后其抗氧化活性明显提高,过敏性明显降低。主要表现为牛乳酪蛋白复合酶酶解物经大孔吸附树脂洗脱得到4个组分,其中75%的乙醇洗脱组分的·OH清除效果较高,其EC50值为0.14mg/mL。将75%乙醇洗脱组分通过凝胶过滤色谱分离,得到3个不同分子量段的多肽组分,3个组分的抗氧化效果与酶解物相比均有较大幅度的提高,其中组分3的·OH清除率的EC50值最低,为0.0922mg/ml,其抗氧化活性与酶解物相比扩大33.84倍,对应的相对分子质量为355.38~854.89u。75%乙醇洗脱组分分离纯化后,相对分子质量小于3238.05u的多肽占纯化后多肽总量的60.32%,其中30.09%多肽是由2-8个氨基酸组成的寡肽。(3)光照、温度和pH对牛乳酪蛋白肽乳基料粉的抗氧化活性有较大的影响,特别是直射光、高温和过酸过碱能显著降低其抗氧化活性。因此,牛乳酪蛋白肽乳基料粉应在避光、隔氧、低温条件下储存,同时应避免与酸碱接触。