bFGF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进根尖牙乳头干细胞增殖

来源 :遵义医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Dark_tomato
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:研究 Wnt/β-catenin信号通路在 bFGF刺激根尖牙乳头干细胞(Stem Cells from the Apical Papilla,SCAP)过程中发挥的作用。分析Wnt/β-catenin信号通路中β-连环蛋白(β-catenin),T细胞因子1(T cell factor1,TCF1),T细胞因子3(T cell factor3,TCF3),淋巴细胞增强因子1(Lymphoid enhancer factor1,LEF1)在bFGF作用SCAP增殖作用中的变化情况;明确bFGF是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控SCAP增殖能力。  方法:实验分为三部分。实验一:通过有限稀释法克隆化培养人根尖牙乳头干细胞(SCAP);并对获得细胞进行初步鉴定:采用免疫荧光染色检测SCAP间充质干细胞标志物 STRO-1、CD24、波形丝蛋白以及角蛋白的表达情况;体外成骨成脂诱导鉴定细胞分化能力。实验二:以0,5ng/ml,10ng/ml,15ng/ml不同浓度bFGF作用SCAP2天后采用实时定量聚合酶链反应(Real Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测基因β-catenin的表达。以15ng/mlbFGF作用 SCAP2天采用 RT-PCR检测基因TCF1,TCF3,LEF1的表达。实验三:研究在Wnt/β-catenin信号通路抑制的情况下, bFGF对 SCAP的增殖情况的影响。实验组为 Wnt/β-catenin信号通路阻断组(bFGF+Dkk1),同时设立阳性对照组bFGF(+)和阴性对照组bFGF(-)培养7天后以流式细胞术检测细胞周期及MTT比色法(四唑盐比色试验)检测SCAP的增殖情况。本实验相关实验数据结果均采用SPSS19.0数据统计分析软件统计分析。  结果:1.获得SCAP原代细胞,3天可见细胞贴壁,5天左右可见少量细胞呈集落生长,细胞形态大多呈短梭性,细胞胞浆丰富,胞体较小。2.免疫荧光鉴定细胞表面分子:小鼠抗人STRO-1抗体染色细胞胞浆呈阳性染色,胞核DAPI染色;小鼠抗人CD24抗体染色胞浆呈阳性染色,胞核呈DAPI染色;小鼠抗人波形丝蛋白抗体染色胞浆呈阳性染色,胞核呈DAPI染色;兔抗人角蛋白染色细胞胞浆无着色,呈阴性染色,胞核为DAPI染色。3.细胞多向分化能力鉴定:成骨成脂诱导3周后分别染色,可观察到有矿化结节及脂滴形成。4.SCAP在 bFGF(0)、(5ng/ml)、(10ng/ml)和(15ng/ml)的完全培养基培养2天后,RT-PCR检测基因表达的结果:bFGF(15ng/ml)上调了β-catenin基因的表达(P<0.05);SCAP在bFGF(0)和bFGF(15ng/ml)的完全培养基培养2天后,RT-PCR检测基因表达的结果:bFGF上调了TCF1,TCF3和LEF1基因的表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。5.细胞增殖能力的检测:(1).MTT法检测细胞增殖得出:与对照组相比,bFGF可促进SCAP增殖(P<0.05),利用Dkk1阻断Wnt/β-catenin信号通路后,bFGF对 SCAP增殖能力减弱,与bFGF组比较结果无统计学意义(P>0.05);与阴性对照组比较增殖能力增强(P<0.05)。(2).流式细胞仪检测细胞周期:bFGF(-)组细胞G1期(83.7%),G2期(6%),S期(10.3%),bFGF(+)组细胞G1期(74.8%),G2期(6.1%),S期(19.1%),bFGF(+)+Dkk1组细胞 G1期(80.8%),G2期(4.5%),S期(14.7%)。bFGF刺激SCAP后细胞S期,G1期高于对照组(P<0.05);与bFGF(+)组相比,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,bFGF下调了SCAP细胞S期,G1期的数值(P>0.05);与bFGF(-)组细胞比较,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,bFGF对上调了细胞S期,G1期的数值(P>0.05)。  结论:1.成功分离培养了根尖牙乳头干细胞。2.bFGF作用 SCAP可激活 Wnt/β-catenin信号通路,促进关键分子β-catenin以及下游分子TCF1,TCF3和LEF1基因的表达。3.bFGF通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控SCAP增殖。
其他文献
【摘要】在高中语文合作探究阅读的过程中,教师应当科学把握合作探究阅读的原则,积极创设阅读情境、科学分组;明确合作内容,把握合作时机;调控合作过程,科学合作评价,全面提升高中语文合作探究阅读的效果。  【关键词】高中语文阅读;合作探究;原则;对策  【中图分类号】G632 【文献标识码】A  阅读是语文教学中重要的组成部分,是语文教学的重点。从根本上讲,语文教育改革的核心和要点,就是要改变学生长期被
目的:1.调查颧骨骨折术后各种症状的恢复情况。2.颧骨骨折术后并发症的发生情况。3.探讨针对各种颧骨骨折的最佳手术入路、复位方法和固定方式。方法:对山东大学附属山东省立医
公路建设作为我国交通运输事业发展不可或缺的重要组成部分,其建设质量对于投入使用之后的行车安全及物资运输等有着十分显著的影响,而对于公路建设质量影响最大的就是路基部