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目的:研究骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)在骨关节炎(Osteoarthritis，OA)中的调控作用，探讨其可能涉及的信号转导通路，并初步观察OPN对OA软骨细胞的功能学效应。 方法: 1、取13名非OA患者（8男5女，年龄53.1±-12.8岁）和13名OA患者（6男7女，年龄68.8±7.9岁）的髋、膝关节软骨组织，Real-timeQ PCR技术检测比较两组软骨标本中OPN及基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）基因表达水平，统计分析OPN与MMP-13表达的相关性。Ⅱ型胶原酶一步消化法处理OA软骨组织，分离培养OA软骨细胞并传代，取第一代OA软骨细胞继续培养，予以1ug/ml浓度的OPN干预，分别采用Real-time Q PCR和WesternBlotting检测不同时间点(0h，24h，48h，72h) MMP-13 mRNA和蛋白的表达水平;然后以不同浓度的OPN（0，0.5，1，2，4ug/ml）干预OA软骨细胞，培养48h后再次观察MMP-13 mRNA和蛋白表达水平的差异，确定细胞实验中OPN干预效用最强的最佳浓度及时间。 2、取第一代OA软骨细胞继续培养，分为空白对照组和PDTC(Pyrrol idinedithiocarbamic acid，inhibitor of NF-κB)组，每组再分为Con-siRNA亚组、OPN-siRNA亚组、OPN亚组。免疫荧光技术检测各组NF-κB(nuclear factor-κappaB) p65核内外的表达情况，WesternBlotting检测各组NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-13、Ⅱ型胶原的蛋白水平。 3、构建、包装、制备OPN-shRNA慢病毒载体备用，取第一代OA软骨细胞，分为空白对照、Con-shRNA、OPN-shRNA、OPN四组，MTT和BrdU两种不同方法检测比较四组OA软骨细胞增殖能力的差异。 结果: 1、与非OA患者比较，OA患者软骨组织中OPN及MMP-13基因均高表达（OPN0.848±0.068 VS1.281±0.085，P=0.0010; MMP-130.971±0.081 VS1.269±0.079，P=0.0091），且软骨组织中MMP-13的表达水平与OPN呈正相关（R2=0.761，P＜0.001）;1ug/ml OPN于预软骨细胞24h后，MMP-13 mRNA和蛋白的表达显著增高(P=0.0039;P=0.0041)，48h时达到峰值(P=0.0001;P=0.0004)，72h时其表达仍处于高水平(P=0.0001;P=0.0004);不同浓度OPN干预软骨细胞48h后，MMP-13 mRNA和蛋白的表达均增高，且1 ug/ml浓度组增高最显著(P=0.007; P=0.003)。 2、OPN干预OA软骨细胞后，NF-κB p65核内移表现增加，OPN-siRNA转染细胞后核内移减少。OPN可显著上调NF-κB p65(P=0.0027)、p-NF-κB p65(P=0.0021)、MMP-13(P=0.0079)的蛋白表达水平，并下调Ⅱ型胶原表达水平(P=0.0188);转染OPN-siRNA后，NF-κB p65(P=0.0026)、p-NF-κB p65(P=0.0168)、MMP-13（P=0.0023）蛋白表达水平明显下降，Ⅱ型胶原水平则显著上升(P=0.0226); NF-κB抑制剂(PDTC)可明显拮抗OPN对以上四种因子的调控效应（p65 P=0.00320; p-p65 P=0.0346;MMP-13 P=0.0213;Ⅱ型胶原P=0.0422）。 3、OPN-shRNA可成功感染OA软骨细胞，抑制OPN基因及蛋白的表达，感染率达80％以上;MTT试验:与对照组相比，OPN-shRNA组OA软骨细胞OD(490nm)值在第2、3、4、5天4个时间点均明显下降(P＜0.05)，OPN干预组OD(490nm)值显著增加(P＜0.05);Brdu实验:24h时，四组细胞OD(490nm)值无统计学差异(P＞0.05);48h后，OPN-shRNA组OA软骨细胞OD(490nm)值较对照组明显下降(P=0.0162)，OPN干预组OD(490nm)值显著增加(P=0.0287)。 结论: 1、OPN可上调OA软骨组织和细胞中MMP-13的表达; 2、OPN可加速OA软骨细胞NF-κB p65核内移，上调NF-κBp65、p-NF-κB p65、MMP-13蛋白表达的水平，下调Ⅱ型胶原的蛋白表达水平; 3、OPN可加速OA软骨细胞增殖; 4、OPN激活NF-κB通路，上调MMP-13蛋白表达，水解Ⅱ型胶原可能是OA发病机理的重要组成部分。