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目的: 感染诱发的失控性炎症反应目前临床治疗方法非常有限，严重威胁危重病患者的生命，脂多糖(LPS)作为革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，在大多数炎症反应中起到主要介导作用。研究表明，LPS诱导的TLR4信号通路的活化需要MD-2介导，而我们发现目前已经报道的非磷脂类MD-2抑制剂多以查尔酮为母体，鉴于我们前期实验活性筛选发现查尔酮衍生物L6H21在巨噬细胞中具有良好的抗炎效果，所以我们进一步探究L6H21的抗炎活性及作用机制。 方法: 1.采用计算机辅助分子对接、等离子表面共振技术、荧光检测、ELISA、流式细胞技术及免疫共沉淀等方法对L6H21进行体外的MD2抑制活性筛选和结合动力学研究。 2.采用western blot、荧光NF-κB p65核转移和EMSA方法探索L6H21对TLR下游MAPKs和NF-κB通路活化的影响。 3.用ELISA及荧光定量PCR方法对L6H21进行巨噬细胞层面上的抗炎活性测试。 4.采用LPS诱导的重症脓毒症小鼠模型对L6H21进行体内抗炎药效研究。 结果: 1.L6H21能以MD-2为靶点抑制LPS诱导的TLR4活化。 1)分子对接表明L6H21能线性嵌入到MD2的疏水性口袋中，并且与Leu-78、Phe-121、Cys133及Ile-153残基形成疏水作用。 2)蛋白-小分子结合动力学研究及荧光检测表明L6H21可以呈浓度依赖地与MD2结合。 3) L6H21能在分子水平和细胞水平拮抗LPS与MD-2的结合。 4) L6H21的拮抗作用只针对MD-2/TLR4信号通路，对TLR2无影响。 2.L6H21抑制LPS诱导的MAPKs磷酸化和NF-κB活化。 1) L6H21可呈浓度梯度抑制ERK、p38和JNK的磷酸化。 2) L6H21呈浓度梯度逆转LPS诱导的IκB降解，抑制p65核转移及转录因子NF-κB的活性。 3.L6H21在巨噬细胞中抑制LPS诱导的炎症因子产生及mRNA表达。 4.L6H21在体内对重症脓毒症小鼠具有保护作用。 1) L6H21可提高LPS诱导的重症脓毒症小鼠存活率。 2)缓解重症脓毒症小鼠的急性肺损伤。 3)抑制重症脓毒症小鼠体内炎症因子产生及mRNA表达。 结论: 我们证实了新合成查尔酮衍生物L6H21具有以MD-2为靶点抑制TLR4信号通路（MAPK/NF-κB）激活、抑制LPS诱导的炎症反应的药理作用，并且对LPS诱导的重症脓毒症小鼠具有保护作用。靶向MD2的抗炎药物有望成为治疗急性炎症的候选新药。