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近年来脂肪肝已成为一种严重危害人类身体健康的常见疾病,为寻找有效治疗脂肪肝的药物,根据中药理论,我们自拟了中药复方GST。本研究将对此中药复方进行筛选,探讨其防治脂肪肝的作用和机制。研究分为5个部分进行:第1部分:采用高脂饲料喂养小鼠,分别于2周、3周、4周观察小鼠血脂、肝脂、肝指数和肝组织病理改变(HE及苏丹Ⅲ染色),建立小鼠高脂性脂肪肝模型。结果发现高脂组小鼠饲养2周后,血清TC、LDL-C和HDL-C含量、TC/HDL-TC比值、肝指数、肝组织TC、TG含量显著升高,第3-4周继续维持在高水平:肝组织病理切片观察到高脂组小鼠2周时脂肪肝已经形成,在实验过程中肝脂肪变程度随时间的持续而逐渐加重。实验表明高脂饲料喂养的小鼠2-4周内可形成不同程度脂变的脂肪肝,为抗脂肪肝的药物研究提供了良好的动物模型。第2部分:采用小鼠高脂性脂肪肝模型(高脂饲养2周),运用正交设计方法,观察肝指数和肝组织甘油三酯(TG)含量变化,对中药复方GST进行筛选。通过正交分析和药效学研究,筛选出了人参、三七和天麻为防治脂肪肝的最佳组方,此组方即为中药复方GST;并确定了药物的最佳用药剂量(国家知识产权局专利申请号:200910038735.2)。第3部分:建立人肝细胞株(L02细胞)脂肪变性模型(50%小牛血清+2%乙醇),油红O染色证实建模成功后,应用正交实验对中药GST主要成分进行筛选。研究证实GST主要成分的最佳组方为:人参茎叶皂苷、三七总皂苷和天麻素,并确定了体外培养的最佳用药浓度,此主要成分组方具有明显改善L02细胞脂肪变性的作用(国家知识产权局专利申请号:200910038736.7)。第4部分:在第3部分研究的基础上,探讨中药GST主要成分组方防治肝细胞脂肪变性的机制。应用流式细胞术检测肝细胞活性氧和线粒体膜电位;采用反相高效液相色谱分析法测定肝细胞ATP含量;应用RT-PCR方法检测肝细胞CYP2E1及PPARαmRNA表达。实验证实中药GST主要成分组方改善肝细胞脂肪变性的作用可能与增加肝细胞PPARαmRNA表达,减少肝细胞TG产生;降低CYP2E1 mRNA表达,抑制活性氧(ROS)产生、抗脂质过氧化反应,改善线粒体膜电位,增加ATP合成有关(国家知识产权局专利申请号:200910038736.7)。第5部分:采用小鼠高脂性脂肪肝模型(高脂饲养12周),肝组织病理切片(HE染色)证实建模成功后,分别用中药GST、GST主要成分组方和降血脂药物辛伐他汀给小鼠灌胃2周。观察这些药物对血清TC、TG,HDL-C、LDL-C、ALT及肝组织TC、TG含量、肝指数、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、PPARαmRNA和CYP2E1 mRNA表达、肝组织病理变化的影响。研究结果表明中药GST及其主要成分组方具有有效治疗脂肪肝的作用,其机制可能与增加肝组织PPARαmRNA表达,降低血清和肝组织TG含量,改善肝细胞脂肪变性,抑制CYP2E1 mRNA表达,抗脂质过氧化反应有关。而辛伐他汀具有明显降血脂作用,但却增加肝脂含量,促进脂质过氧化反应,加剧肝脏脂肪沉积。(国家知识产权局专利申请号:200910038736.7.200910038735.2)。