【摘 要】
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随着生活水平的提高,人们对牛肉的需求量和肉品质不断提高,而且牛的产肉量和肉品质直接影响畜牧业经济效益。骨骼肌作为畜禽体重的主要组成部分,对其发育机制的探索对畜禽生产具有重要意义。除遗传因素外,饲料摄入、营养添加等因素同样参与肌肉发生发育调控。丁酸属于短链脂肪酸之一,主要由肠道微生物发酵纤维所产生,并作为信号分子通过不同的途径调控机体代谢和肌纤维形成。为了明确丁酸对牛肌纤维增殖分化及形成的影响,本试
【基金项目】
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本论文研究受国家自然科学基金“编号:32160776”和宁夏自然科学基金“编号:2021AAC03027”资助
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随着生活水平的提高,人们对牛肉的需求量和肉品质不断提高,而且牛的产肉量和肉品质直接影响畜牧业经济效益。骨骼肌作为畜禽体重的主要组成部分,对其发育机制的探索对畜禽生产具有重要意义。除遗传因素外,饲料摄入、营养添加等因素同样参与肌肉发生发育调控。丁酸属于短链脂肪酸之一,主要由肠道微生物发酵纤维所产生,并作为信号分子通过不同的途径调控机体代谢和肌纤维形成。为了明确丁酸对牛肌纤维增殖分化及形成的影响,本试验分离牛骨骼肌卫星细胞(SSCs),并添加丁酸钠,探讨丁酸钠处理对牛SSCs的生物学调控。主要内容如下:1、通过酶消化法分离牛原代SSCs,并用Desmin免疫荧光鉴定法和诱导分化鉴定法证实分离的细胞为牛SSCs,采用qRT-PCR法验证了牛SSCs诱导分化后骨骼肌分化标志基因MyoD1、Myf6、Myog的表达。结果表明成功分离获得牛原代SSCs;2、通过qRT-PCR、CCK-8及流式细胞技术检测丁酸钠处理对牛原代SSCs细胞增殖、分化与凋亡相关基因的表达。丁酸钠极显著下调细胞增殖相关基因CDK1、CDK2、CCNB2、MCM3、PCNA的表达(P<0.01);丁酸钠极显著下调骨骼肌细胞分化标志基因MyoD1、Myf6、Myog的表达(P<0.01);同时,丁酸钠极显著下调抑制细胞凋亡基因Bcl-2的表达(P<0.01),促细胞凋亡相关基因p53、Bax的表达极显著上调(P<0.01)。结果表明,丁酸钠抑制牛SSCs增殖和分化、促进其凋亡;3、通过Werstern blot、qRT-PCR、电子显微镜及免疫荧光等技术检测丁酸钠处理对牛SSCs线粒体自噬及其生物合成的影响。丁酸钠处理能够促进牛SSCs线粒体自噬小体产生,同时丁酸钠处理增加了细胞ROS积聚、提高细胞ATP及线粒体拷贝数,同时降低了线粒体膜电位。此外,丁酸钠处理能够极显著上调关键线粒体自噬酶PINK1、LC3B的mRNA和蛋白表达,极显著下调p62的mRNA和蛋白表达。表明丁酸钠处理促使线粒体发生自噬,并调节牛SSCs线粒体生物合成。4、通过qRT-PCR方法检测丁酸钠处理对牛SSCs mTOR通路的影响,结果表明丁酸钠极显著下调牛SSCsmTOR信号通路中mTOR、FOXO1、AKT1、EIF4EBP1基因的表达(P<0.01)。通过mTOR信号通路抑制剂处理牛SSCs细胞发现,mTOR通路抑制剂对牛SSCs细胞增殖分化、凋亡及线粒体自噬调控与丁酸钠处理结果一致。本研究初步明确丁酸钠处理牛SSCs能够抑制SSCs细胞增殖与分化,同时促进细胞凋亡与线粒体自噬。丁酸钠对SSCs的影响可能通过介导mTOR信号通路实现对牛SSCs的增殖分化等过程。
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