兔支气管败血波氏杆菌病是由支气管败血波氏杆菌(Bordetella Bronchiseptica,Bb)引起的一种家兔呼吸道传染病,该病病程长,反复发生,治愈困难,给养兔业带来了严重的的经济损失。目前预防该病的全菌疫苗保护力不高,急需研究新的疫苗候选成分,为该病的诊断和预防提供依据。外膜蛋白(Outer-membrane proteins, OMPs)在抗药性、致病性、免疫原性等方面具有重要作用。本研究应用蛋白质组学方法筛选Bb的免疫原性蛋白和可能的毒力因子,以期寻找新的免疫原性蛋白和毒力相关蛋白。1.Bb双向电泳图谱的建立为了建立Bb OMPs的2-DE图谱,本研究利用碳酸钠法提取OMPs后,采用双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对其进行分离,并分别对pH值、上样量、聚焦条件、染色方法等进行优化。结果表明,用裂解液5M Urea,2MThiourea,2%CHAPS,2%SB3-10溶解蛋白,pH4-7的13cm线性胶条考染上样量为750μg、银染上样量为75μg,聚焦条件为500V,2h,1000V,1h,8000V,2.5h,8000V,4h时,能获得聚焦良好、分离清晰的Bb OMPs图谱。本研究首次建立了Bb OMPs的2-DE图谱,为其蛋白质组学研究奠定了基础。2.Bb免疫蛋白质组学研究利用免疫蛋白质组学方法,以兔抗Bb免疫混合血清作为一抗,与通过双向电泳凝胶转印到PVDF膜上的Bb OMPs外膜蛋白进行免疫印迹,从中挖取35个具有免疫原性的蛋白,经MALDI-TOF-TOF-MS鉴定,成功鉴定了34个蛋白,对应23种蛋白质。其中,Bb的延长因子Tu已证实有免疫原性,其他22种蛋白均是首次在Bb中证实有免疫原性,对这些蛋白质进行亚细胞定位,功能预测等分析,其中有7种为膜蛋白,4种定位在外膜上,3种定位在内膜上,3种周质蛋白,3种胞外蛋白,8种胞质蛋白,2种未知定位,功能涉及：细胞运动及分泌,翻译后修饰、蛋白质转换和分子伴侣,能量代谢和转移,氨基酸转运和合成,细胞壁合成,翻译、核糖体结构和合成及功能未知蛋白。这些蛋白有希望成为Bb疫苗的候选成分。3.Bb差异蛋白质组学研究利用差异蛋白质组学方法,从两株毒力不同的Bb菌株OMPs中筛选致病性差异相关蛋白,以期发现Bb新的毒力因子。RB和HB分别分离自健康兔和鼻炎症状的病兔。HB对小鼠半数致死量为2.42×106cfu/ml,RB对小鼠表现出低致病性。将表达有差异的OMPs经过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS或MALDI-TOF-TO-MS鉴定,成功鉴定了19种蛋白质,这些蛋白按照功能分为如下几类：无机离子转运和代谢,细胞壁合成,细胞运动及分泌,能量代谢和转移,翻译后修饰、蛋白质转换和分子伴侣,氨基酸转运和合成,翻译、核糖体结构和合成,功能未知蛋白及COG数据库中无相关信息的蛋白。这些蛋白的发现有助于进一步了解Bb的致病机理。