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虫霉目真菌属接合菌亚门,接合菌纲,是一类极具开发潜力的生防菌,能寄生多种昆虫,具有主动弹射分生孢子的特性,并能在合适的气候条件下引起害虫的自然流行病,因此早在19世纪后期就被人们所研究和重视。20世纪70年代以后,随着我国生物防治研究的进一步深入开展,虫霉目真菌日益为我国的学者所重视,虫霉目真菌在我国的研究由此也进入了一个新的阶段。不同地区的虫霉目资源的调查对于利用、研究和开发这些真菌显得尤为重要。国内学者就一些地区的虫霉菌种类资源进行了一些报道,并对一些种类进行了研究。本文对山东省虫霉菌资源进行了调查,同时,对分离得到的块耳霉菌株Taian00927进行了研究。主要的研究内容和结果有: 1.本文综合国内已发表的文献和我院昆虫病原微生物研究室近两年所采集的标本,依据Humber(1989)的分类系统,共报道了山东省16种虫霉目真菌,分别隶属于虫霉目3科9属,对它们的鉴别特征、寄主、产地及分离培养情况进行了详细的描述和报道,同时列出了这些虫霉菌的种类检索表。初步估计山东省共有虫霉菌24种。介绍了几种虫霉菌的发生及流行特征。 2.系统地研究了本室分离获得的块耳霉菌株Taian00927的生物学特性。当RH=100%时,温度从15℃到30℃均适宜该菌株孢子萌发,湿度较低时,以RH=97.5%和温度为20℃的温湿组合较为适宜孢子萌发。适宜该菌株生长和产孢的温度范围为20~30℃。该菌株对酸性的敏感性强于对碱性的敏感性,适宜该菌株孢子萌发、菌落生长和产孢的pH范围是5.5~7.0。紫外线照射2.5min后,24h的孢子萌发率仅为58.5%,照射5min后萌发率小于2%,照射10min后,完全不萌发。光照和黑暗交替有利于菌落生长和产孢。 3.本试验采用石蜡切片技术,对块耳霉侵染寄主棉蚜过程的组织病理学进行了研究。弹射到棉蚜体壁上的块耳霉孢子,在适宜的条件下6h内就可以萌发生成芽管,芽管的生成可以在孢子的一端,也可以在两端。萌发的孢子明显膨大,并呈现网格状。8~12h,附着在体壁上的孢子形成细长的芽管成功穿透寄主体壁。侵入寄主体内的菌体,以网格状无壁的原生质体形式生长繁殖。原生质体形态大小各异,有球形,椭球形,变形虫形和不定形,并包被有颗粒—纤维状物质。原生质体首先在寄主的血腔中快速生长,大约在侵染后的24~36h,寄主血腔中充满原生质体。侵染后的40~64h寄主体内的胚胎开始被原生质体所消解,这个过程发生在寄主死亡以后,这也是原生质体在寄主体内最后消化的一个较大的固体组织。当寄主棉蚜的营养物质全部被耗尽,原生质体开始变长,出现细胞壁,形成菌丝段。尔后菌丝段充满整个虫体。菌丝段充满虫体后,开始向虫体外伸展,突破虫体后形成分生孢子梗。本试验明确了块耳霉在蚜虫组织中生长的形式为原生质体,并将侵染致病过程划分为4个阶段,在国内外属首次报道。通过采用诱导酶合成的培养平板,发现该菌株在生长过程中能分泌几丁质酶和蛋白酶。 4.采用“孢子浴”方法测定了块耳霉菌株Taian00927对1~2龄桃蚜的毒力(25℃,12L/12D)。观察期为7d,7个孢子剂量,孢子剂量范围4.37~205.22孢子/mm2,每个剂量下的供试蚜虫数量65~145头,7d的累计死亡率15.83%~83.82%。经时间—剂量—死亡率模型模拟分析,得出块耳霉作用于桃蚜的时间剂量效应参数,第4d、第5d、第6d和第7d的LD50分别为325.84、136.14、76.38和62.81孢子/mm2。 2 李伟:山东省虫霉菌资源调查和块耳霉菌株Taian00927的研究同时提出了在不同的抱子剂量下块耳霉作用于寄主蚜虫的3种方式。 5.探讨化学农药与昆虫病原真菌之间的相容性,为在蚜霉菌流行期间合理施用化学农药提供参考依据,采用测量菌落直径法和培养M计数法,研究了20种常用杀虫剂、7种杀真菌剂和10种除草剂对块耳霉菌株Taian00927生长和产抱的影响。供试验的20种杀虫剂对块耳霉菌落生长均有极显著影响(P<0.01),其中有12种杀虫剂的抑菌率达到60$以上,对块耳霉生长起到强烈的抑制作用。在6.8~7.cd间@统计各杀虫剂处理平板2.sh产抱量的结果表明,除经植物性杀虫剂苦参碱处理的菌落的产抱量高于对照外,其余19种杀虫剂处理平板上菌落的产抱量均不同程度地低于对照。7种杀真菌剂中普力克对块耳霉菌落生长无任何抑制作用,多菌灵与块耳霉表现出良好的相容性,抑菌率为24.59%,其余5种药剂对块耳霉菌落生长产生极显著性(P<0.01)影响,抑菌率超过80%;10种除草剂中仅巨星和百草敌与块耳霉表现出良好的相容性,抑菌率分别为 8.7%和 11.08%,其余 8种除草剂的抑菌率均超过75%,对块耳霉菌落生长产生强烈的抑制作用。关于化学除草剂对昆虫病原真菌生长的影晌,在国内外本研究尚属首次。