【摘 要】
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胆碱单加氧酶(CMO)是植物体内胆碱合成甜菜碱过程中的关键酶。甜菜碱是一种非毒性的渗透调节剂,在植物耐盐中起着重要的作用。CMO基因受盐诱导表达,随着环境中盐浓度的提高,
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胆碱单加氧酶(CMO)是植物体内胆碱合成甜菜碱过程中的关键酶。甜菜碱是一种非毒性的渗透调节剂,在植物耐盐中起着重要的作用。CMO基因受盐诱导表达,随着环境中盐浓度的提高,其基因表达量增加,CMO基因的诱导表达与其启动子(pC:-267～+1 bp)有关。AtMYB2转录因子是一个受ABA和脱水诱导表达的MYB家族蛋白,它能与-CTAACCA-位点结合,促进下游基因的表达。pC序列上含有一个AtMYB2转录因子的识别位点。本文对AtMYB2转录因子和CMO基因启动子之间的相互作用进行研究,从而分析CMO基因的转录调控机制。本实验克隆了拟南芥的AtMYB2基因,并将该基因转入已含有pC的烟草中,对转基因烟草的GUS活性进行了组织化学染色及荧光定量分析分析,主要结果如下:1、用RT-PCR技术获得了拟南芥AtMYB2基因编码区,该编码区长822bp,编码一个由273个氨基酸组成的多肽。将获得的AtMYB2基因构建克隆载体pUC19-AtMYB2,冻融法导入大肠杆菌感受态细胞DH5α,得到E.Coli- pUC19- AtMYB2。2、构建植物表达载体pBI121-AtMYB2,导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404,获得工程菌LBA4404- pBI121-AtMYB2。3、采用农杆菌介导的叶盘转化法将AtMYB2基因导入转pC烟草,获得具有卡那霉素抗性的转双价基因烟草,PCR检测获得阳性植株。RT-PCR检测表明,AtMYB2基因已在转基因烟草中表达,GUS组织化学分析和GUS荧光定量分析表明,转基因烟草的GUS含量显著增高,说明AtMYB2转录因子能够与CMO基因启动子作用,增强该启动子的功能。
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