异源性纤维蛋白粘合剂修复羊椎间盘纤维环缺损的实验研究

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研究背景:腰椎间盘退变是腰腿痛的主要原因。目前针对椎间盘退变性疾病的外科手术治疗能取得良好的临床效果。对于部分髓核摘除术术中需进行纤维环切开,但术后会导致纤维环永久性的缺损,这样就使腰椎单位的生物力学也彻底发生了改变。纤维环的闭合及修复在临床中逐渐受到脊柱外科医生的重视。本研究分为四个部分:第一部分羊纤维环部分缺损动物模型的构建目的:通过微创手术制造羊腰椎纤维环部分缺损构建羊腰椎间盘退变动物模型。方法:选用18只健康雌性成年绵羊,随机分为两组,A组:腰椎微创手术造模组,B组:腰椎假手术组。结果:1.X线片:术后3周A组即出现椎间隙变窄,并逐渐下降。术后3、6、12周A组椎间盘高度变化无差异(P>0.05),对照组各时点椎间盘高度变化无显著性差异(P>0.05),A组与B组3个时点均有显著性差异(P<0.05)。2.核磁共振检查:实验组椎间盘髓核T2信号随时间推移而降低,且椎间隙逐渐变窄;而对照组椎间盘髓核T2信号始终一致呈高强度,椎间盘高度前后一致;3.组织学评价:mansion染色见A组纤维环排列紊乱,细胞数及水分减少,髓核体积缩小,纤维环和髓核界线模糊不清。结论:从X线、MRI及组织形态学三个方面分析证明羊腰椎间盘退变动物模型造模成功。第二部分纤维蛋白粘合剂对纤维环细胞的毒性研究目的:进行猪源纤维蛋白粘合剂对纤维环细胞毒性研究;方法:纤维环细胞(AFCs)的分离、培养及传代、鉴定,CCK-8法进行细胞毒性研究;细胞毒性检测分为4组,分别为阴性对照组(DMEM培养基)、50%纤维蛋白粘合剂浸提液组、100%纤维蛋白粘合剂浸提液组和阳性对照组(64g/L的苯酚溶液)。结果:阴性对照组的吸光值与50%、100%纤维蛋白胶浸提液组比较,无差异(P>0.05),且均小于阳性对照组(P<0.05)。结论:纤维蛋白粘合剂对AFCs不存在显著细胞毒性。第三部分纤维环缺损在应用猪源纤维蛋白粘合剂后的体外力学试验目的:进行体外猪源纤维蛋白粘合剂结合缝合纤维环缺损生物力学测试。方法:采集新鲜羊腰椎脊柱标本,共制成30个脊柱功能节段(FSU),分为3组,A组(实验组):对缺损的纤维环用可吸收聚丙烯缝合线进行缝合并用猪源纤维蛋白粘合剂进行粘合;B组(对照组):单纯对缺损的纤维环用可吸收聚丙烯缝合线进行缝合;C组:在对比A组和B组后选择对纤维环闭合效果较好一组的方法进行处理形成C组并进行循环加载疲劳试验。结果:A组极限承载力为2921.3±897.2N,显著高于B组795.4±277.6N(P<0.01)。A组可成功对抗给予的循环压力(400N,共10,000循环),而无髓核渗漏。结论:应用猪源纤维蛋白粘合剂结合缝合后的纤维环缺损有较强的承载能力。第四部分猪源纤维蛋白粘合剂对纤维环缺损修复的实验研究目的:评估猪源纤维蛋白粘合剂对羊纤维环缺损修复作用的在体研究。方法:纤维环缺损手术过程同造模组,实验分为四组:假手术组,空白对照组(纤维环缺损后不做任何处理),对照组(单纯缝合)和实验组(猪源纤维蛋白粘合剂+缝合),通过X线、MRI及组织学分析评估纤维环修复效果,同时检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)。结果:采用猪源纤维蛋白粘合剂联合缝合对在体纤维环缺损的修复作用较好,可能机制为通过下调腰椎间盘退变组织中bFGF及上调TGF-β1的表达促进缺口的愈合。结论:猪源纤维蛋白粘合剂有良好的生物相容性,有闭合纤维环缺损的作用。
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