论文部分内容阅读
以美洲黑杨(Populus deltoides Bartr．“Lux”（I-69／55）为母本，欧美杨(P.euramericana cv.（I-45）为父本得到的F1子代群体187个无性系为材料，开展杨树STS分子标记检测和抗黑斑病的SCAR标记研究，同时对PCR-SSCP分析条件进行优化，取得了以下几个方面的进展： 1．分别从胶浓度、交联度、甘油的有无、电压和电泳温度等几个方面对影响PCR-SSCP结果稳定性因素进行了探讨，结果表明：胶浓度、电压和电泳温度是影响PCR-SSCP结果稳定性的重要因素，不同大小片段应采用不同的胶浓度、恒定低温（小于10℃）和低压（小于200V）下进行电泳； 2．采用PCR-SSCP分析方法，用F1代187个无性系对29对STS引物进行分析，筛选了3对有多态性的STS标记：Win3，p164，P770，每个标记取杂合型及纯合型共四个无性系（2个亲本，2个子代），每个无性系挑一个克隆进行测序，并且将所得序列用Clustal w和Blastn软件进行在线分析，结果表明： Win3标记四条序列长分别为45：255bp，69：254bp，116：255bp，117：256bp。Clustal w分析结果显示45、69、116、117四条序列之间主要是第148个碱基（116和117分别比45、69多了一个A和G）、第163个碱基（117多了一个T）和第168个碱基（A转换成G）存在差异；Blastn分析结果表明该序列与毛果杨伤诱导表达的gwin3基因、杨属H11-11色氨酸蛋白酶抑制子（win3.12基因）以及黑杨的win3标记（168bp）有很高的同源性。 p164标记四条序列45、69、01、06长均为164bp，只在第124个碱基位置存在一个碱基的差异（A转换成G）。Blastn分析未发现其同源序列。 P770标记四条序列长分别为：45：643bp，69：641bp，08：651bp，10：650bp。Clustal w分析表明：45、69、08、10四条序列间差异较大。Blastn分析未发现其同源序列。 3．将与杨树抗黑斑病基因相连锁的RAPD标记：OPA117-1550、OPA113-900，成功地转化成显性的SCAR标记（SA117-1）和共显性的SCAR标记（SA113-2），并对感病池、抗病池和F1代90个无性系进行了SCAR标记检测，在抗病池和F1代无性系的OPA117-1550阳性植株中扩增出了一条与预期结果相符的特异性条带，而感病池和F1代无性系OPA117-1550阴性植株中没有带，在抗病池和F1代无性系的OPA113-900阳性植株中扩增出了两条带，而在感病池和F1代无性系的OPA113-900阴性植株中只有一条带。 Southern杂交表明：抗病池中不同的OPA117-1550阳性植株、OPA113-900阳性植株序列之间分别是同源的，且基因组内也存在OPA117-1550和OPA113-900的同源序列。