本研究采用碳化二亚胺法制备LH-BSA免疫原,免疫BALB/c小鼠;用方阵滴定法确定包被抗原最适工作浓度,检测抗血清,建立间接酶联免疫吸附法(ELISA),利用细胞融合和杂交瘤技术筛选稳定分泌抗LH的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA测定所制备得单克隆抗体的效价,并用竞争性ELISA方法测定抗LH单克隆抗体的亲和常数,检测了与其他激素的交叉反应性。获得以下结果:1建立了抗LH抗体测定的间接ELISA方法。方阵滴定法确定包被原最适工作浓度为1.0μg/mL,最适包被液为pH 9.6,0.05 mol/L的CBS;辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(酶标二抗)最适稀释倍数为l∶1 500,1.5%明胶封闭。重复性好,批间重复的变异系数(CV)0.72%~1.07%。2用50%的PEG 4 000融合细胞,融合效率达到81%,阳性率达到14.7%。经过4次筛选,最终筛选出3株稳定分泌特异性抗LH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E11、B5、D7。3细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。3用筛选到的3株杂交瘤细胞株腹腔注射BLAB/c小鼠,制备腹水,间接ELISA测定腹水效价均为1∶1×106,其亲和常数均为108。单抗与FSH和hCG交叉反应率均小于5%。