【摘 要】
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根据从拟南芥中已经克隆的支持烟草花叶病毒复制的基因TOM1序列设计一对特异性引物,用RT-PCR的方法获得番茄同源基因的部分序列,然后利用5’RACE与3’RACE方法从番茄中克隆出全
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根据从拟南芥中已经克隆的支持烟草花叶病毒复制的基因TOM1序列设计一对特异性引物,用RT-PCR的方法获得番茄同源基因的部分序列,然后利用5’RACE与3’RACE方法从番茄中克隆出全长TTOM1基因。TTOM1全长cDNA有1280个碱基对,编码288个氨基酸,有7个跨膜区,是个典型的跨膜蛋白。TTOM1编码产物与拟南芥TOM1的编码有74.9%的同源性。cDNA水平有59.1%的同源性。用PCR的方法扩增TTOM1基因的近5’端2.6Kb的DNA片段,构建反义植物表达载体pBIT1-2,通过三亲结合的方法将其导入到农杆菌EHA105中。用此农杆菌侵染番茄得到12株转基因番茄。PCR反应以及Southern杂交实验表明,外源基因片段已经插入到番茄的染色体中。用黄瓜花叶病毒CMV接种转基因番茄植株,其症状出现的时间比非转基因番茄对照要延迟7天左右。以接种CMV后的新长出的叶片作为毒源,接种枯斑寄主植物苋色藜,评估病毒在转基因植株中的相对浓度。结果表明,转反义TTOM1番茄植株产生的枯斑数比非转基因番茄植株的枯斑数显著减少,表明转基因番茄中CMV的浓度要明显低于非转基因对照植株,证明番茄TTOM1基因是与CMV的复制效率有关的一个寄主因子。
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