特异性卵黄抗体对灿烂弧菌感染仿刺参的保护作用研究

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“腐皮综合征”因其高感染率和高死亡率,被认为是危害仿刺参养殖的最严重疾病之一。灿烂弧菌(Vibrio splendidus)是引起“腐皮综合征”的主要致病菌之一,且感染范围广,致病性强。目前,对该病的防治主要依靠抗生素和化学药物,但药物的长期大量使用甚至滥用,不仅导致耐药性菌株的出现,而且还会影响食品安全和生态平衡,间接严重危害人类健康。本研究以灭活灿烂弧菌为抗原,免疫蛋鸡制备特异性卵黄抗体(IgY)。酶联免疫吸附实验测定特异性IgY最高效价达1:320000。经水稀释-冻融-两步盐析-超滤分离纯化IgY,最终获得抗体纯度达83%。液体和固体两种培养条件下,特异性IgY能显著抑制灿烂弧菌的生长(P<0.05)并有效防止该菌在培养基上的黏附,表明IgY具有黏附阻滞作用。结晶紫染色法和微生物碳氢吸附能力实验表明,特异性IgY能显著降低灿烂弧菌的被膜形成能力和表面疏水性(P<0.05),进而减弱其黏附力,降低其致病性。免疫荧光电镜、扫描电镜和透射电镜观察显示,特异性IgY与抗原菌亲和力强,且能凝集抗原菌,并使菌体表面结构变得粗糙,改变其细胞表面结构,甚至影响菌体细胞壁完整性。特异性IgY与灿烂弧菌的反应液中碱性磷酸酶含量显著升高(P<0.05),表明特异性IgY能够破坏菌体细胞壁。动物实验中,腹腔攻毒后注射和浸浴特异性IgY,感染仿刺参的存活率分别为80%和75%,极显著地高于对照组的20%和15%(P<0.01);浸浴特异性IgY后腹腔攻毒,感染仿刺参的存活率为80%,显著高于对照组的15%(P<0.01),表明特异性IgY对感染仿刺参具有良好的治疗和预防效果。平板菌落计数实验表明,注射特异性IgY后,仿刺参体壁、肠道、呼吸树和体腔液中载菌量显著降低(P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明,特异性IgY处理的吞噬细胞,其吞噬率提高了56.5%(P<0.05),共聚焦显微镜观察也同样证实上述结果。免疫相关酶和因子检测表明,特异性IgY能显著增强仿刺参碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶和超氧阴离子等的活性,增强仿刺参的非特异性免疫机能,对防治灿烂弧菌感染产生积极的免疫调理作用。综上,本研究制备的特异性IgY对灿烂弧菌感染仿刺参具有良好的治疗和预防效果。IgY作为安全、绿色和高效的抗生素替代品,在仿刺参养殖中具有广阔应用前景。同时本实验也为IgY抑菌机制的深入研究提供参考。
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