在选煤厂中聚丙烯酰胺常用作絮凝剂对煤泥水进行絮凝沉降,聚丙烯酰胺的高分子侧链上带有大量的活性基团因而具有良好水溶性和絮凝性。但残留于选煤厂循环水中的聚丙烯酰胺会影响浮选药剂的吸附率,此外若选煤厂循环水未得到妥善处理外排到环境中将会污染地下水。目前已有不少学者从环境中筛选出微生物菌种用于降解含聚丙烯酰胺废水,但环境菌种的降解率偏低且菌种生长周期较长,不适于工业化生产。原生质体融合技术具有可跨越种属间界限融合多个亲本菌株遗传基因的优点,因此,利用原生质体融合技术构建有效降解选煤厂循环水中残留聚丙烯酰胺的工程菌,对改善降解菌种对聚丙烯酰胺的降解特性有着十分重要的研究意义。本论文以球红假单胞菌和枯草芽孢杆菌为研究对象,先驯化球红假单胞菌及枯草芽孢杆菌,考察驯化后的球红假单胞菌及枯草芽孢杆菌对煤泥水中残留聚丙烯酰胺进行复配降解的特性,优选出复合降解菌种对煤泥水中残留聚丙烯酰胺进行降解的最优工艺参数;采用原生质体融合技术,将球红假单胞菌与枯草芽孢杆菌融合,获得对煤泥水中残留聚丙烯酰胺降解率较高的融合菌株,探究原生质体制备的最优工艺参数;然后对比融合子与复合降解菌种对煤泥水中残留聚丙烯酰胺的降解效果。试验结果表明:球红假单胞菌与枯草芽孢杆菌经过一段时间的驯化能被诱导为对聚丙烯酰胺有降解作用的功能菌;复配球红假单胞菌和枯草芽孢杆菌进行PAM的降解试验,在因素水平组合为“培养温度”为35℃,“pH为”7,“菌液添加量”2mL。最优参数下进行降解培养时,复合菌对聚丙烯酰胺的降解率为39.24%;球红假单胞菌原生质体制备过程的最优因素水平为蔗糖浓度20%,溶菌酶浓度1.0mg/mL,EDTA浓度为0.2%,作用时间为60min。在此条件下,原生质体形成率为63.7%,再生率为8.9%。枯草芽孢杆菌原生质体制备的最优因素水平为蔗糖浓度20%,溶菌酶浓度1.5 mg/mL,作用时间为60min。在上述条件下,原生质体形成率为58.5%,再生率为9.45%;在复合降解菌种最优降解条件下融合子对聚丙烯酰胺的最终降解率为53.14%。通过对比融合子与复合降解菌种对煤泥水中残留聚丙酰胺的降解效果,结果显示融合子对煤泥水中残留聚丙烯酰胺的降解效果明显增强,原生质体融合子兼具了两亲本的优良性状。