银杏叶多糖降解产物对巨噬细胞抗炎抗氧化活性的影响

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我国富含丰富的银杏叶资源,银杏叶产量占世界70%以上,已知从银杏叶中提取的银杏叶多糖具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等多种生物学活性。但因其分子量大,难以突破细胞屏障,从而制约了其活性的发挥,造成了极大地资源浪费。本试验将对银杏叶多糖进行降解,通过检测其对自由基、脂质过氧化物及炎症相关因子的影响来系统阐述多糖降解后活性的变化,试验内容如下:本研究首先采用化学法将银杏叶多糖进行降解,然后分析其分子量、多糖含量、蛋白质含量等理化性质;再通过MTT法确定降解银杏叶多糖及LPS对RAW264.7巨噬细胞的安全浓度,荧光定量法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量建立细胞模型。在验证对于降解银杏叶多糖抗氧化性能测定时,先检测不同浓度降解前后银杏叶多糖对DPPH与O2-·的清除能力;再设置空白组(CON)、模型组(LPS)、未降解银杏叶多糖组(LPS+GBLP)、低中高降解银杏叶多糖三组(LPS+DGBLP)共六个组,采用生化法检测降解银杏叶多糖对RAW264.7巨噬细胞MDA与SOD的影响。对于降解银杏叶多糖对于RAW264.7细胞抗炎活性的影响,设置空白组(CON)、模型组(LPS)、未降解银杏叶多糖组(LPS+GBLP)、低中高降解银杏叶多糖三组(LPS+DGBLP)共六个组,采用ELISA与荧光定量PCR等方法检测细胞内炎症介质的分泌与表达。试验结果显示,银杏叶多糖经降解后分子量由194190 Da降至26410 Da;降解银杏叶多糖添加浓度为16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL时RAW264.7细胞活力与空白组比较无显著差异;细胞模型中LPS最适添加浓度为1μg/mL;在通过检测银杏叶多糖降解后对DPPH与O2-·清除率发现降解银杏叶多糖具有良好的体外抗氧化活性;在对银杏叶多糖降解后对RAW264.7巨噬细胞氧化应激影响的探讨中发现,与模型组相比,添加降解银杏叶多糖能抑制细胞内MDA含量,促进SOD的产生;在抗炎方面,降解银杏叶多糖能不同程度抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、COX-2、iNOS、IL-10的分泌与表达,促进的产生TGF-β1的产生。综上所述,银杏叶多糖降解后分子量减小,可有效的清除自由基,抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化应激与炎症反应,且在高剂量下效果优于未降解银杏叶多糖。
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