Myopodin蛋白在细胞和组织中表达和分布的研究

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Myopodin是最新发现的synaptopodin蛋白家族的第二个成员。除了synaptopodin蛋白外,它和已知的蛋白没有明显的同源关系。Myopodin在氨基酸序列的N端及C端分别具有一个经典的入核信号(NLS),同时在氨基酸序列的410-563位之间还有一个肌动蛋白(actin)结合位点,可以直接与肌动蛋白相互作用,因此它是一种结构蛋白。Myopodin也是一种细胞核质蛋白,其在细胞核质中的分布受分化和应激的调控。 为了进一步研究Myopodin蛋白的功能,我们首先制备其抗体。构建了融合表达载体pGEX4T2-N-Myopodin。将构建好的表达载体转化大肠杆菌并诱导表达,把表达的N-Myopodin蛋白纯化后做抗原,免疫兔子后,得到多克隆抗体。以得到的抗体通过免疫荧光染色,发现Myopodin在癌细胞HeLa和T24主要分布在细胞质中,MG63在细胞质和细胞核中都有,而在正常的细胞NIH3T3和293T,Myopodin主要分布在细胞核中;通过免疫组化,发现,在消化系统的食道、胃和肠的正常组织和癌变组织中,Myopodin蛋白表达的量几乎没有变化,而且在正常组织和癌变组织中,Myopodin蛋白主要都是分布在细胞质中,细胞核中几乎没有,可能myopodin在癌细胞中分布有特异性,这是我们首次观察到的myopodin在不同细胞系中的表达分布,并且myopodin在细胞核质中的分布与癌症的发生和发展有相关性。通过免疫印迹和免疫组化,发现,已经发生癌变的肝组织中的Myopodin比癌旁肝脏组织中的Myopodin明显减少,这也是我们首次发现的Myopodin蛋白与肝癌的相关性。这些都为一些癌症特别是肝癌的诊断和治疗提供了一种潜在的手段,也为它们的治疗和相关药物的开发提供了积极的线索。
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