【摘 要】
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目的:建立稳定表达ABCG2蛋白的A549-ABCG2细胞系并观察其生物学特性变化,为选择敏感化疗药物及制定临床治疗方案提供研究基础。方法:非小细胞肺癌组织标本中提取总RNA,RT-PCR
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目的:建立稳定表达ABCG2蛋白的A549-ABCG2细胞系并观察其生物学特性变化,为选择敏感化疗药物及制定临床治疗方案提供研究基础。方法:非小细胞肺癌组织标本中提取总RNA,RT-PCR获得ABCG2全序列基因后插入pcDNA3.1质粒,转染A549细胞系,用G418挑取克隆稳定筛选并命名为A549-ABCG2细胞。RT-PCR及Western blot鉴定克隆基因及蛋白表达。通过流式细胞术,MTT法检测ABCG2高表达细胞的药物敏感性,检测ABCG2蛋白ATP激酶活性,分析其与耐药之间的相关性。结果:RT-PCR及Western blot显示A549-ABCG2细胞目的基因和蛋白表达稳定。经流式细胞仪检测后发现,A549凋亡细胞明显多于A549-ABCG2细胞且使用多柔比星后G1峰前出现明显凋亡峰,细胞凋亡率为6.7%,使用羟基喜树碱后A549-ABCG2细胞S期减少14.7%,G1期增加了13.5%;A549细胞S期增加了18.9%,G1期减少了18.5%。MTT实验结果表明A549-ABCG2细胞化疗药物敏感性较A549细胞明显降低,而其ATP激酶活性明显升高,药物剂量和作用时间与ATP激酶活性之间具有正相关性。结论:A549-ABCG2细胞系对化疗药物的作用出现耐受,我们可以通过研究ABCG2高表达细胞系A549-ABCG2来筛选化疗药物为临床ABCG2高表达患者治疗服务。
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