PK-15细胞微载体悬浮培养生产猪细小病毒疫苗的工艺开发和初步代谢流研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangyang0121
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猪肾细胞(PK-15)对多种猪类病毒敏感,广泛应用于兽用疫苗的生产和研发。本文开发了适于PK-15细胞生长的廉价低血清培养基P-LSM(含3%新生牛血清),该培养基适于PK-15细胞静置培养和微载体悬浮培养,并且利于猪细小病毒的繁殖。  本文开发了基于PK-15细胞低血清静置培养的猪细小病毒生产工艺,最大病毒滴度达到7.5 Lg TCID50/ml。成功将此工艺从静置培养转移到微载体悬浮培养,并完成了1.5L和5L反应器上的验证实验,最大病毒滴度达到7.2 Lg TCID50/ml。最大病毒滴度较生产企业增加了10倍。并首次发现了乳酸对葡萄糖得率与病毒滴度的正相关性,可作为指针病毒滴度以及收毒时间的重要参数。  利用13C标记葡萄糖和谷氨酰胺的代谢流分析技术,本文就PK-15细胞的代谢和猪细小病毒接种PK-15细胞前后的细胞代谢变化进行了初步研究,并初步构建了PK-15细胞中心碳代谢的网络模型。研究发现在细胞延滞期,葡萄糖主要进行有氧糖酵解;指数生长期,部分葡萄糖开始通过丙酮酸脱氢酶经乙酰辅酶A进入TCA循环;进入稳定期后,部分葡萄糖开始通过丙酮酸羧化酶进入TCA循环;谷氨酰胺主要为TCA循环提供能量和中间代谢物。PK-15细胞接种病毒后,更多的葡萄糖通过磷酸戊糖途径、Ser-Gly途径和天冬氨酸,进入核苷酸合成;更多谷氨酰胺转化成天冬氨酸,合成核苷酸。
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