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抗坏血酸作为一种重要的抗氧化剂,在植物细胞的酶促和非酶促反应中都具有重要意义。脱氢抗坏血酸还原酶以谷胱甘肽为底物,催化脱氢抗坏血酸还原为抗坏血酸,在循环利用抗坏血酸、保护细胞组分抵御氧化损伤中发挥重要的作用。本研究是在获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶基因(DHAR)的基础上构建其植物表达载体,并将其转入根癌农杆菌EHA105中,然后通过农杆菌介导法将DHAR基因导入仙客来,并初步探讨了DHAR基因在仙客来中的转化和表达情况,为仙客来抗性品种改良及分子育种奠定基础。主要研究结果如下:1.构建了DHAR基因植物表达双元载体pCSB-DHAR并将其导入根癌农杆菌。利用DNA重组技术,将质粒pSB166中包含ED35s-Omega-MCS-UTT-TNOS的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303上,经酶切、电泳鉴定表明,已成功构建了植物中间表达载体pCSB。双酶切重组质粒pMD18-T-DHAR及中间表达载体pCSB,将DHAR基因片段与线性表达载体pCSB进行定向连接,构建了DHAR基因的植物表达载体pCSB-DHAR,通过酶切、电泳鉴定表明,DHAR基因已成功构建到植物表达质粒中,将此克隆命名为pCSB- DHAR。采用冻融法,将重组质粒pCSB-DHAR导入农杆菌EHA105中,在含有卡那霉素、链霉素和利福平的平板上筛选阳性克隆,至有单菌落出现,提取质粒DNA,进行双酶切和PCR扩增检测,结果表明重组质粒己导入农杆菌EHA105中。2.对载体pCSB-DHAR进行Gus基因的瞬时表达检测,确定其具有较理想的转化效率。用导入重组质粒pCSB-DHAR的农杆菌侵染百合叶片后,对其进行2周的Gus基因瞬时表达检测,结果表明侵染后7d瞬时表达率可达100%,说明载体具有较理想的转化效率。3.优化了农杆菌介导的以仙客来叶片为受体的遗传转化体系,获得了转DHAR基因仙客来植株。通过研究DHAR基因转化中影响叶片转化效率的多种因素,确定了各主要影响因素的值。试验结果表明:2d的预培养,OD600值为0.6的工程菌液浓度,侵染时间15min,3d的共培养,延迟筛选两周能获得较高的转化率。2.5mg·L-1到7.5mg·L-1逐步升高的Hyg浓度对仙客来叶片有较好的筛选作用。经抗性筛选获得154株抗性株系,对其进行PCR检测,有32个株系呈阳性,初步证明DHAR基因已整合到仙客来基因组中。