目的在全球范围内胃癌的死亡率在恶性肿瘤中居于第三位,因为早期胃癌临床表现并不典型,所以使得相当一部分患者发现时已处于疾病晚期,失去了手术根治机会。肿瘤标志物目前已被作为发现恶性肿瘤的预警分子或早诊分子,但是目前尚胃癌缺乏具有敏感性及特异性的分子标志物。本研究在前期由第四军医大学已经完成了对于鼠抗人胃癌单克隆抗体MG5在胃癌中的表达,鉴定及功能机制的研究,通过质谱分析、免疫荧光和慢病毒感染等方法明确了MG5的抗原鉴定为溶酶体相关蛋白(lysosoomal associated protein,LAMP)中膜蛋白LAMP2的三个亚型之一LAMP2A,本课题主要是研究MG5/LAMP2A在人正常胃黏膜细胞和不同胃癌细胞株中的蛋白表达,以及胃癌组织中的表达与患者预后之间的关系;以及干扰LAMP2A蛋白表达后肿瘤细胞功能学特点。方法本研究收集了就诊于天津医科大学肿瘤医院、空军医科大学附属西京医院和上海交通大学瑞金医院2004年1月至2007年9月期间接受胃癌根治术患者术后癌和癌旁组织组织芯片(100例)及其完整的临床随访资料,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测组织切片中MG5/LAMP2A蛋白表达情况,并分析MG5/LAMP2A蛋白表达对胃癌预后评估意义,及其与其他临床病理特征的相关性。蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测胃癌各细胞株和正常胃黏膜细胞中LAMP2A蛋白表达水平差异。用PCR技术对LAMP2A进行基因表达分析,从而在核苷酸的水平上分析正常胃黏膜细胞和不同人胃癌细胞株中的转录水平;经由干扰质粒转染下调MG5/LAMP2A的蛋白表达,通过WB对下调LAMP2A基因表达后的胃癌细胞内MG5表达的检测。对干扰后的人胃癌细胞和原胃癌细胞进行细胞功能试验,从而评估下调LAMP2A基因表达后胃癌细胞的复制、转移和侵袭等生物学行为的差异。结果1.应用免疫组化和组织芯片的方法对LAMP2A检测胃癌组织中蛋白水平的表达,在100个患者的肿瘤组织中LAMP2A高表达的有59人;而在其癌旁组织中仅有39人表达阳性,其差别在统计学上具有显著性(P=0.015)。2.WB技术检测在GES-1细胞中MG5/LAMP2A蛋白的表达水平明显低于各个胃癌细胞株中的表达(P<0.05);PCR技术检测在GES-1细胞中MG5/LAMP2A信使RNA的表达水平明显低于各个胃癌细胞株中的表达(P<0.05)。3.单因素生存分析结果表明:患者TNM分期、淋巴结转移数目、淋巴结转移范围以及MG5/LAMP2A蛋白的表达水平与胃癌患者的预后密切相关(P<0.05);多因素生存分析(COX风险回归模型)表明MG5/LAMP2A蛋白的表达影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。4.向人胃癌细胞株HGC-27中转染MG5/LAMP2A干扰质粒以下调MG5/LAMP2A表达,通过细胞克隆实验、MTT、划痕实验和Transwell侵袭实验证实经干扰后的胃癌细胞其增殖、侵袭、迁移和细胞活力均明显下降,且其差别在统计学上具有显著性(P<0.05)。结论1.通过统计学分析证实MG5/LAMP2A蛋白在胃癌组织的表达水平是影响胃癌患者预后的独立危险因素。MG5/LAMP2A蛋白高表达的胃癌患者预后较差,可考虑作为胃癌判断患者预后的预测指标之一。2.在胃癌组织MG5/LAMP2A基因的转录和翻译明显多于癌旁非肿瘤组织,提示胃粘膜恶变的出现和进展与MG5/LAMP2A的表达存在一定关联。3.细胞功能学实验证实通过下调MG5/LAMP2A表达可以抑制胃癌细胞增殖,迁移和侵袭等行为,也提示着MG5/LAMP2A的表达与胃癌的生物学行为特点的机制存在关联。