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目前影响胚胎种植的因素很多包括宫腔粘连、输卵管积水,宫腔形态异常、输卵管积水、子宫内膜受损,但治疗这些疾病之后,仍会出现多次移植高质量胚胎仍未妊娠,称为反复植入失败(Repeated Implantation Failure, RIF),约占ART的5%-10%。给患者的经济和精神都造成了极大的打击,如何改变这类患者的治疗结局,提高种植成功率,成为生殖专家和胚胎学家探讨的热点问题。目的CD4+ CD25+调节性T细胞(Regulatory T cell, Treg)是最近被人们认识的一类重要的具有免疫调节功能的T细胞亚群,其功能障碍可能与自身免疫性疾病密切相关,并且参与维持外周T细胞内环境的稳定,在移植耐受中起着关键作用。在胚胎的植入和早期的妊娠维持中,也发挥着很重要的作用。CD4+CD25+Treg细胞的发育受转录因子Foxp3调控,用携带Foxp3逆转录病毒载体向初始型CD4+T细胞导入,Foxp3则可实现CD4+T细胞向CD4+CD25+Treg细胞转化,说明Foxp3可能是CD4+CD25+Treg细胞分化发育和功能维持的重要调节基因。调节型T细胞因子：主要包括转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-p,TGF-β)、IL-10,调节辅助性T细胞的分化,参与机体的免疫应答和免疫耐受。本课题旨在通过研究黄体期及取卵后6天,外周血Treg数目和Foxp3、TGF-β的mRNA的表达情况,进一步对反复失败的原因进行研究。方法1.选择2009年11月至2010年2月郑州大学第一附属医院生殖中心反复种植失败患者16例,选择同期接受IVF-ET第一周期妊娠患者25例作为对照组。2.月经来潮第12天开始早晚测尿LH试,出现阳性后6天或月经来潮第22天-26天(周期30-35天)抽血检测孕激素(progestogen,P)水平,若P值≥5ng/ml即黄体期收集静脉血。取卵后6天一样收集空腹静脉血3ml,放置于EDTA的抗凝管中,其中2ml进行Foxp3和TGF-β的mRNA水平的检测,lml用于流式细胞仪的检测。3.采用半定量RT-PCR法检测外周淋巴细胞Foxp3和TGF-β的mRNA水平;流式细胞仪检测外周血CD4+CD25high+CD127-Treg占CD4+T细胞的比率,间接反应Treg得数目。结果1.两组年龄和新鲜周期数均有统计学差异(P<0.05),反复种植失败组的年龄和新鲜周期数都明显高于对照组。男性原因、女性原因、不明原因不孕两组均无统计学差异(P>0.05)。月经来潮第2-4天基础内分泌FSH、LH、E2两组无统计学差异(P>0.05)。2.反复种植失败组与对照组相比,GnRH-a天数、GnRH-a量、HMG天数、HMG量、HCG日E2、OPU日E2、OPU后48hE2均无统计学差异(P>0.05)。而两组FSH启动剂量、FSH天数、FSH量均有统计学差异(P<0.05)。在反复种植失败组的FSH用量及使用天数,以及启动剂量明显高于对照组。3.反复种植失败组较对照组获卵数少,优质胚胎率高,均有统计学差异(P<0.05)。两组MⅡ率、2PN受精率、2PN胚胎卵裂率、胚胎利用率均无统计学差异(P>0.05)。4.反复种植失败组和对照组相比,d(LH+6)、d(OPU+6)外周血Treg数目均有统计学差异(P<0.05),对照组显著高于反复失败组。5.反复移植失败组外周血d(LH+6)、d(OPU+6)Foxp3mRNA和对照组相比有统计学差异(P<0.05)。6. d(LH+6)、d(OPU+6)Treg数目进行配对资料T检验,两者之间无统计学差异(P>0.05)。7. d(OPU+6) Treg数目与年龄、周期数成负相关性(P<0.05),相关系数分别为-0.369、-0.639；与获卵数、FSH启动支数、FSH天数、FSH支数、HCG日E2、OPU日E2、OPU48小时E2均无相关性(P>0.05)。8. d(LH+6) Treg数目与年龄、周期数成负相关(P<0.05),相关系数分分别为-0.324、-0.639。9.在控制年龄的情况下,d(LH+6)、d(OPU+6)Treg数目与周期数偏相关分析,发现Treg数目与周期有负相关性(P<0.01),偏相关系数为分别为-0.686、-0.578,随着周期的增多,Treg数目减少。10.反复种植失败组外周血d(LH+6)、d(OPU+6)TGF-βmRNA较对照组有显著性的差异(P<0.05)。结论1.反复种植失败的患者外周血Treg细胞数目明显减少以及功能相关基因Foxp3的表达降低,可能是反复种植失败免疫性不孕的原因。2.在控制性超排卵的E2水平并不影响外周Treg细胞的数目。3.年龄和周期数都是影响外周血Treg细胞的数目相关因素,随着年龄增大和周期增多,外周血Treg细胞的数目减少；在控制年龄的情况下,周期与外周血Treg细胞负相关。4.免疫抑制因子TGF-p在反复种植失败的患者外周血中表达降低,可能是其免疫性不孕的原因。