【摘 要】
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背景:Calnexin（CANX）是抗原呈递过程中的重要成分之一,CANX的异常表达影响人主要组织相容性复合体I（MHC-I）的组装、抗原肽加工以及在肿瘤细胞表面的呈递,因此可能有助于肿瘤逃避免疫监视。课题组前期证实,CANX通过调节MHC-I的表达,增加CD8+T细胞的浸润而影响结直肠癌（Colorectal cancer）病人的生存。然而,导致CANX异常表达的上游调控机制仍然未知,本文从mi
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背景:Calnexin（CANX）是抗原呈递过程中的重要成分之一,CANX的异常表达影响人主要组织相容性复合体I（MHC-I）的组装、抗原肽加工以及在肿瘤细胞表面的呈递,因此可能有助于肿瘤逃避免疫监视。课题组前期证实,CANX通过调节MHC-I的表达,增加CD8+T细胞的浸润而影响结直肠癌（Colorectal cancer）病人的生存。然而,导致CANX异常表达的上游调控机制仍然未知,本文从miRNA角度分析调控CANX表达的分子机制。目的:筛选并验证靶向调控CANX的miRNA;并分析目标miRNA介导的CANX/MHC-I表达改变对肿瘤免疫的影响。方法:1.靶向CANX的miRNA筛选及验证选择CANX差异表达的人结直肠癌细胞系DLD-1和LoVo,利用miRNA PCR array平台从88种免疫相关的miRNAs中,筛选差异表达的miRNAs,qRT-PCR进一步验证;利用miRNA靶基因预测数据库,分析并预测可能靶向CANX的miRNA;使用双荧光素酶报告系统验证miR-148a-3p对CANX的靶向作用;Western blot检测miR-148a-3p的过表达/敲减对CANX和MHC-I表达的影响。2.敲减miR-148a-3p对免疫细胞浸润的影响磁珠分选小鼠脾脏CD8+细胞,将分离的CD8+T细胞与稳定敲减miR-148a-3p的小鼠结直肠癌细胞MC-38共培养,CCK8法检测CD8+T细胞对MC-38细胞的杀伤效应,ELISA检测肿瘤坏死因子-a（TNF-a）的分泌;用稳定敲减miRNA-148a-3p的MC-38细胞建立C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,监测肿瘤生长;流式、多重荧光免疫组化检测移植瘤微环境中免疫细胞的浸润情况。结果:1.在DLD-1和LoVo细胞中筛选到14个差异表达的miRNAs;预测并证实miRNA-148a-3p可负调控CANX的表达。2.敲减miR-148a-3p上调CANX和MHC-I的表达、增强CD8+T细胞对小鼠肿瘤细胞的体外杀伤;抑制小鼠肿瘤生长、延长其生存期、增加移植瘤免疫微环境中CD8+T细胞的浸润。结论:miRNA-148a-3p靶向CANX的3’UTR,抑制抗原肽-MHC-I复合物的加工和呈递,促进结直肠癌的免疫逃逸。
其他文献
目的:应用生物信息学方法分析纤维蛋白原样蛋白2（Fibrinogen-like Protein 2,FGL2）与胶质瘤的关系,探讨FGL2在胶质瘤中的潜在预后价值和免疫治疗的靶向性。方法:使用TCGA、GETx和GEO数据库分析FGL2在胶质瘤组织中的转录水平,通过TCGA数据库中低级别胶质瘤和胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）患者的临床资料,分析FGL2的表达与临床病理特征的关系。
目的:探究信号转导和转录激活因子STAT5A及STAT5B在T淋巴母细胞淋巴瘤（T-cell lymphoblastic lymphoma,T-LBL）中的表达,从m RNA和蛋白水平分析STAT5A及STAT5B与疾病的发生、发展以及生存预后之间的关系,为T淋巴母细胞淋巴瘤的临床诊断和治疗提供新的潜在靶点。方法:（1）采用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）的方法检测
背景与目的:乳腺癌是全球女性癌症相关死亡的第二大原因,近年发病率持续上升。转移和复发是乳腺癌患者死亡的主要原因,严重危害患者生命健康。转移性乳腺癌易复发、预后差,生存期仅8个月至3年。因此,探寻转移相关的关键分子对提高转移性乳腺癌患者的生存率具有重要意义。非肌肉肌球蛋白ⅡA（Non-muscle myosin ⅡA,NMⅡA）是细胞的肌动蛋白骨架之一,与细胞的迁移、收缩以及胞质分裂等密切相关。近年
目的:利用体内噬菌体展示技术筛选与人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞结合的小分子多肽并在体内外鉴定其结合特异性及靶向性。方法:1.将人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞接种于裸鼠体内,制备荷瘤裸鼠模型,用噬菌体展示随机环七肽库对荷瘤裸鼠进行3轮体内筛选。免疫组织化学法鉴定噬菌体在肿瘤组织及正常对照组织的分布情况,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测噬菌体克隆对NCI-H1299细胞的结合亲和力,鉴
目的:、肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）占肺癌的40%以上,是临床最难治愈的肿瘤,鉴定在LUAD发生发展中起作用的蛋白质将有助于阐明发病机理并提供新的预后生物标志物。课题组前期构建了高表达ANKRD49的慢病毒载体LV5-ANKRD49,将其感染H1299细胞后,发现其不参与调节细胞增殖,但是可以促进H1299细胞的迁移和侵袭。为研究ANKRD49在H1299细胞迁移和侵
目的:探究基于随机森林的六种变量筛选方法（RFE-RF、biosigner、Boruta、altmann、vita、r2vim）对高维数据进行变量筛选时的性能表现,并选择适当方法用于弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）基因分型诊断。方法:通过模拟研究评价基于随机森林的六种变量筛选方法（RFE-RF、biosigner、Boruta、altma
目的:课题组前期通过对食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）的全基因组测序,发现编码GDP-L-岩藻糖合成关键酶TSTA3基因在ESCC中的拷贝数显著扩增及高表达与淋巴结转移及患者的不良预后密切相关。细胞水平发现TSTA3可显著促进ESCC细胞侵袭迁移,本研究旨在前期工作基础上,进一步明确TSTA3在食管鳞癌中的作用及其介导的异常岩藻糖基化
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目的:宫颈癌严重威胁着女性的健康,高危型HPV（HR-HPV）持续感染是宫颈癌的主要病因但不是唯一因素。随着微生态与肿瘤关系研究的深入,越来越多的研究提示HPV的持续感染和宫颈病变的发生与阴道菌群的多样性密切相关。Toll受体9（TLR9）作为微生物未甲基化CpG基序的特异性受体,与胃癌、肺癌等癌症的发生有关,但TLR9与宫颈病变的关系目前尚无定论,在宫颈病变的发生发展中,阴道菌群与TLR9的相互
目的:这项荟萃分析旨在评估细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4/6抑制剂加内分泌疗法（ET）对绝经后激素受体阳性（HR+）,人表皮生长因子受体2阴性（HER2）晚期乳腺癌（ABC）的疗效性和安全性。方法:我们对PubMed、Embase、Cochrane进行了系统搜索,以获得CDK4/6抑制剂联合ET与单独ET用于绝经后HR阳性,HER2阴性晚期乳腺癌的随机临床对照试验。搜索截止到2020年12月3