【摘 要】
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为了明确Kisspeptin54（Kp54）对原代滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的影响,并初步揭示Kp54对原代滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的调节机制,本研究首先对原代滩羊腺垂体细胞进行分离、鉴定并建立原代滩羊腺垂体细胞的培养体系;在此基础上筛选了 Kp54对滩羊腺垂体细胞作用的最佳剂量及时间,并进一步探讨了 Kp54调控腺垂体细胞促性腺激素合成和分泌的机制及作用的信号通路,主要结果如下:1.采用优
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“Kisspeptin54对乏情季节滩羊的作用及机制研究（No.31760665）”; 宁夏回族自治区自然基金重点项目“Kisspeptin10对乏情季节滩羊卵母细胞体外成熟的影响及作用机制研究（No.NZ17003）”
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为了明确Kisspeptin54（Kp54）对原代滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的影响,并初步揭示Kp54对原代滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的调节机制,本研究首先对原代滩羊腺垂体细胞进行分离、鉴定并建立原代滩羊腺垂体细胞的培养体系;在此基础上筛选了 Kp54对滩羊腺垂体细胞作用的最佳剂量及时间,并进一步探讨了 Kp54调控腺垂体细胞促性腺激素合成和分泌的机制及作用的信号通路,主要结果如下:1.采用优选的1 mg/mLⅣ型胶原酶和1mg/mL透明质酸酶（1:1）的混合消化90 min所取得的细胞个数（5.0× 107个/mL）明显多于采用优选的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液消化45 min所取得的细胞个数（1.8× 107个/mL）（P<0.05）,且前者细胞活率也高于后者;2.用含10%HBS+5%FBS的完全培养液培养滩羊原代腺垂体细胞贴壁时间较使用含15%FBS的完全培养液培养细胞早24h,且细胞状态较好;3.Kp54单独作用滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的最佳浓度为500 ng/mL,Kp54与LHRH共处理滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的最佳浓度为100 ng/mL,Kp54处理滩羊腺垂体细胞促性腺激素分泌的最佳时间为12 h;4.Kp54单独处理滩羊腺垂体细胞后,上调细胞增殖相关基因CDK4、PCNA的表达,并能上调影响促性腺激素合成相关基因GPR54、GnRHR的表达;这些结果表明Kp可能直接通过促进腺垂体细胞增殖或可能间接通过上调GnRHR的表达来促进腺垂体细胞促性腺激素的分泌;5.Kp54在垂体细胞内除了通过经典的激素合成PLC/PKC/Ca2+信号通路外,还可能通过AC/cAMP/PKA信号通路途径来调控垂体前叶促性腺激素的合成。以上研究首次对滩羊原代腺垂体细胞进行了分离、鉴定与培养;首次明确了 Kp54对滩羊腺垂体细胞增殖及类固醇生成的作用并初步揭示了其作用的调控机制,这将有助于完善Kp54对整个生殖轴调控的理论知识;为Kp54在动物繁殖管理上的应用,尤其是在提高绵羊的繁殖力方面提供科学依据。
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