大鼠皮肤挫伤后自体吞噬和代谢物变化与损伤经历时间的研究

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目的:1.研究大鼠皮肤损伤后局部组织和细胞中Beclinl(自噬诱导蛋白)、LC3(自噬标记蛋白)的表达,观察大鼠皮肤损伤后局部细胞自体吞噬现象的变化;研究Beclinl、LC3损伤后表达的时序性,探讨在法医学损伤经历时间推断中的应用。 2.运用核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)技术检测大鼠皮肤损伤后局部代谢物的变化,探讨该检测技术在法医学损伤研究中的应用。 方法:实验动物随机分成正常组及损伤组,每组7~10只;损伤组按皮肤挫伤后致处死时间的不同分为损伤3小时组、6小时组、12小时组、18小时组、24小时组、3天组、5天组、7天组、10天、14天组及死后损伤组;皮肤挫伤方法为:用止血钳夹住背部皮肤致皮下出血。以下为各部分的实验方法: 实验一:大鼠皮肤挫伤后细胞自噬现象的观察。利用免疫印迹技术分析皮肤挫伤后局部自噬相关蛋白Beclinl、LC3表达的变化。 实验二:大鼠皮肤挫伤后局部细胞内Beclinl、LC3表达时序性研究。通过免疫组化方法观察大鼠皮肤挫伤不同时间段后损伤皮肤中细胞内Beclinl、LC3的表达;并通过图像采集、统计分析,研究细胞损伤后Beclinl、LC3表达量与损伤经历时间的关系。 实验三:大鼠皮肤挫伤后代谢物变化与损伤经历时间的研究。皮肤组织样品置于高分辨率魔角旋转(high-resolution magic angle spinning,HRMAS)探头上进行检测;使用预饱和(脉冲序列:zgpr)和CPMG(脉冲序列:cpmgpr)两种方法分别对皮肤组织的核磁共振谱进行分析。 结果:1.损伤2周内皮肤组织相比正常皮肤组织两种蛋白的表达呈显著变化:Beclinl表达增多;LC3 IF/LC3 I值增高。 2.Beclinl、LC3表达于大鼠上皮细胞的胞浆内,少见表达于皮下组织的各细胞内;大鼠皮肤挫伤6小时后局部表皮细胞Beclinl、LC3表达开始增多,在挫伤18小时、1天、3天、5天、7天、10天呈强表达,伤后14天表达减弱。 3.损伤大鼠、非损伤大鼠皮肤组织的NMR图谱之间存在差异,表现在波峰数量、位置等方面的改变,局部亦观察到新的波谱。 结论:1.皮肤损伤后局部细胞自体吞噬增强,细胞的自体吞噬是细胞应对损伤的一种反应。 2.损伤后Beclinl、LC3表达与损伤经历时间呈较强的相关性;Beclinl、LC3可作为法医学损伤经历时间推断的生物学指标。 3.运用核磁共振技术对组织中代谢物的检测可为法医学损伤研究提供新的思路。
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