柠条锦鸡儿咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因cDNA和gDNA全长克隆及生物信息学分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 23次 | 上传用户:chris7520
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木质素是植物次生细胞壁的主要组成成分,它是一种在地球上含量丰富程度仅次于纤维素的高分子有机聚合物。木质素对植物本身和人类的生产、生活都有着重要的影响。咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT)是依赖S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的甲基转移酶,在木质素生物合成过程中起到了重要的催化作用。本研究利用RT-PCR和RACE技术首次从柠条锦鸡儿中克隆得到了两个编码CCoAOMT的cDNA序列和一个gDNA全序列,两个cDNA序列分别命名为CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G,推测它们都属于柠条锦鸡儿CCoAOMT基因家族,gDNA序列包含5个外显子和4个内含子。生物信息学分析结果表明:CCoAOMT-C与CCoAOMT-G都应属于亲水性蛋白,其分子量分别约为28,012.12D和27,970.08D,理论等电点分别为5.55和5.54;两个蛋白都由247个氨基酸残基组成,但在第125和134位氨基酸残基上存在差异,同样两者的二级结构和三级结构也存在不同程度的差异。CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G都具有Methyltransf3结构域和SAM结合位点,因此它们属于O-甲基转移酶家族。针对CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G两个基因构建过表达载体并转化野生型拟南芥,经筛选分别得到3个CkCCoAOMT-C转基因纯合体株系和6个CkCCoAOMT-G转基因纯合体株系。利用半定量RT-PCR检测转基因纯合体植株中目的基因表达量,发现所有株系中的目的基因均有不同程度的表达。
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