表达嵌合抗原受体Jurkat细胞株的筛选及功能研究

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过继性细胞免疫治疗通过体外激活和扩增肿瘤特异或非特异性杀伤细胞达到抗瘤效果,又可分为过继性NK细胞治疗和过继性T细胞治疗。该疗法优势在于起效快,体内因素影响相对较小,近年来发展迅速。嵌合抗原受体的设计CAR是将识别肿瘤相关抗原(TAA)的单链抗体(scFv)和T细胞的活化基序结合为一体,即将抗体对肿瘤抗原的高亲和性和T淋巴细胞的杀伤机制相结合,通过基因转导方法转染T淋巴细胞,使其能特异性地识别和杀伤肿瘤细胞,为过继性细胞免疫治疗注入了新鲜活力。目的:VEGF在各种人类实体瘤中过表达,本课题设计针对VEGF的嵌合抗原受体基因结构FLT1CAR并筛选表达FLT1CAR的Jurkat细胞株,最后检测所筛选的稳定细胞株对VEGF的趋化效果。方法:合成针对VEGF的嵌合抗原受体基因结构,克隆入慢病毒载体;三质粒磷酸钙法共转293T细胞,收集病毒液后感染Jurkat细胞;经G418筛选及克隆挑选得到稳转细胞株;PCR及流式细胞术检测筛选细胞株中目的基因的整合与表达;Transwell实验检测所筛选的细胞株对VEGF的趋化效果。结果:琼脂糖凝胶电泳显示慢病毒载体pLV120gn-FLT1CAR构建正确;PCR及流式细胞术表明FLT1CAR已经整合到Jurkat细胞中并稳定表达;趋化实验表明筛选的细胞株Clone1、Clone2对VEGF有显著趋化效果。结论:本文成功筛选到稳定表达FLT1CAR的细胞克隆,并且此细胞克隆对VEGF有明显的趋向作用,为后续临床细胞治疗提供了理论基础。
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