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肉制品掺假现象严重影响了消费者的知情权与公平交易权,带给消费者一定经济损失的同时,还有可能会威胁到消费者的身体健康,引起食物过敏或中毒。而牛肉作为掺假肉的高危肉种,构建一种短时间的、高灵敏性的检测肉品掺假的方法是非常有必要的。目前,甄别生肉的方法和技术已经很成熟,但是肉制品在加热的过程中引起某些蛋白质发生某种变化,对熟食制品的掺假检测造成了一定的困难,如蛋白质在特定的温度下发生变性、溶解性减小以及抗原性的丢失等。而肌肉中热稳定性好的肌肉蛋白质或物种中所特有的热稳定肌肉蛋白的发现,成功的解决了酶联免疫检测的技术难关。据外文文献报道,牛肌红蛋白（BMb）是一种对热比较稳定的蛋白质,因此可以将该蛋白作为特异性的蛋白来检测牛肉掺假。本实验的探讨的是经过使用原核表达系统得到BMb,将其免疫到BALB/c小鼠,制备鼠抗BMb多克隆抗体,并且通过对BMb氨基酸序列的分析选取特异性的氨基酸片段免疫BALB/c小鼠,筛选出2株特异性好的细胞株,为以后建立检测熟牛肉的夹心ELISA或者竞争ELISA检测方法提供一定的理论基础。实验结果如下:（1）重组蛋白的表达和纯化:通过在NCBI中获取到BMb的氨基酸序列,22条引物被设计用来经重叠PCR扩增合成全基因,经过对基因片段和质粒Pet-28a的酶切,再经过T4 DNA连接酶的连接,再被转化到菌株Rosetta（DE3）中,通过诱导剂（IPTG）的诱导作用,最终得到BMb的融合蛋白,使用镍柱亲和层析对融合蛋白纯化处理。（2）多克隆抗体的制备:将得到的融合蛋白免疫到小鼠体内,抗血清的效价和敏感性分别使用ELISA方法中的间接和间接竞争法来检测,效价均达到了1:32000,IC50=50.12μg/ml,经纯化获得质量较好的鼠抗BMb多克隆抗体。（3）单克隆抗体的制备:经过对牛,猪,鸡、鸭、鼠的肌红蛋白氨基酸序列对比分析,选取特异性较好的肽段与KLH偶联后免疫到小鼠体内,经过细胞融合,筛选,成功获得了2株细胞株,经小鼠腹腔接种得到的单克隆抗体在1:64000以上,通过辛酸-硫酸铵盐析纯化得单克隆抗体,其纯度较高。