【摘 要】
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ST细胞系(猪睾丸细胞系)是猪瘟病毒等猪源病毒的敏感细胞系,常用于猪瘟病毒的分离培养和体外增殖。本研究旨在构建稳定表达T7 RNA聚合酶的猪睾丸细胞系(ST细胞系),用于猪瘟病
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ST细胞系(猪睾丸细胞系)是猪瘟病毒等猪源病毒的敏感细胞系,常用于猪瘟病毒的分离培养和体外增殖。本研究旨在构建稳定表达T7 RNA聚合酶的猪睾丸细胞系(ST细胞系),用于猪瘟病毒等的反向遗传操作。采用PCR方法,以BHK/T7细胞基因组为模板扩增T7 RNA聚合酶基因,将其定向插入到真核表达载体pIRES2-EGFP中,得到pIRES2-EGFP-T7,用脂质体法转染ST细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时用RT-PCR及T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达载体瞬时转染,检测T7 RNA聚合酶的表达,经过15次传代后能检测到T7 RNA聚合酶的稳定表达,建立了稳定表达T7 RNA聚合酶的细胞系ST/T7,为猪瘟病毒等的反向遗传操作技术提供了研究工具。
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