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目的:观察高血压病肝阳上亢证病人与正常人血清蛋白质的差异表达,寻找高血压病肝阳上亢证相关的特异性表达的蛋白质,建立高血压病肝阳上亢证的蛋白质表达谱,探讨其病证的本质内涵。
方法:
(1)选择高血压肝阳上亢证病人23例为实验组,正常健康志愿者10 例为正常对照组。抽取高血压病肝阳上亢证患者与正常人血清空腹静脉血5m1,离心提取血清。
(2)运用去除白蛋白试剂盒(sigma 公司)有效的去除血清标本中的白蛋白与球蛋白,优化血清样品的制备,变更上样与电泳条件,双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide)分离高血压病肝阳上亢证患者与正常人的血清标本,考马斯亮兰染色,PDQUEST图像分析系统分析,选取分离较好的差异蛋白质点,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-Ms)获取肽质量指纹图谱(peptide mass fingel-prints),Mascot软件搜索MSDB数据库鉴定蛋白质。
结果:
(1)获得了分辨率较高、重复性较好的高血压病肝阳上亢证与正常人血清双向凝胶电泳图谱,二者凝胶图谱的平均蛋白质点数依次为200±18个,198±22个。
(2)比较分析高血压病肝阳上亢证与正常人血清双向凝胶电泳图谱,发现两者间有16个差异蛋白点。
(3)对差异蛋白质点进行了肽质量指纹图分析,得到8个有意义蛋白质点,发现C反应蛋白,载脂蛋白,N甲基一天冬氨酸蛋白受体,血清铜蓝蛋白、转铁蛋白、血红蛋白等在高血压病肝阳上亢证表达上调,糖蛋白表达下调。
结论:
(1)建立了高血压病肝阳上亢证与正常人的血清双向凝胶电泳图谱。
(2)认为高血压肝阳病上亢证是一个多种蛋白参与的多因素发病机制。血清比较蛋白质组学分析是一种筛选病证相关蛋白的可靠方法之一。C反应蛋白,载脂蛋白,N甲基一天冬氨酸蛋白受体,血清铜蓝蛋白、转铁蛋白、血红蛋白等与高血压病肝阳上亢证发病密切相关。