【摘 要】
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哈维氏弧菌已经成为我国乃至全球范围的最主要水产动物病原之一。对大量养殖水产动物造成了非常严重的危害,成为世界各地区水产业可持续健康发展的重大阻碍。为了深入探索哈维氏弧菌的致病机理,探究哈维氏弧菌重要的毒力(相关)基因。本文以哈维氏弧菌野生株GDH11385及其不同毒力的紫外突变株为对象,采用比较基因组学技术、实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术和人工感染试验,深入挖掘哈维氏弧菌的毒力(相关)基因
【基金项目】
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国家自然科学基金“海南地区哈维氏弧菌病原分子血清型特征及毒力相关基因鉴定研究(编号:31660744)”; 国家“十三五”海洋经济创新发展示范城市项目“南海微生物资源开发与利用公共服务平台建设(编号:HHCL201813)”; 国家“十三五”海洋经济创新发展示范城市项目“海南热带土著有益菌种微生态制剂系列产品开发与产业链构建(编号
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哈维氏弧菌已经成为我国乃至全球范围的最主要水产动物病原之一。对大量养殖水产动物造成了非常严重的危害,成为世界各地区水产业可持续健康发展的重大阻碍。为了深入探索哈维氏弧菌的致病机理,探究哈维氏弧菌重要的毒力(相关)基因。本文以哈维氏弧菌野生株GDH11385及其不同毒力的紫外突变株为对象,采用比较基因组学技术、实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术和人工感染试验,深入挖掘哈维氏弧菌的毒力(相关)基因。对哈维氏弧菌紫外突变后的10株不同毒力的菌株进行重测序,并以野生型哈维氏弧菌菌株GDH11385的基因组作为参考基因组,对基因组重测序结果进行分析。结果表明,10个突变株共获得SNP突变45个、In Del突变21个。其中位于基因编码区的SNP突变35个,基因间区的SNP突变10个;位于基因编码区的In Del突变12个,基因间区的In Del突变9个。菌株间共享SNP突变10个,共享In Del突变13个。紫外诱导所产生的突变有明显的选择偏好性,其突变规律与之前报道的规律有较大不同。通过不同毒力表型组别间的比对筛选,已筛选出10个毒力(相关)基因,通过GO数据库、KEGG数据库、VFDB数据库、NR数据库等的注释信息,结果表明,这些基因的功能与细胞运动,细胞外结构,细胞壁/膜/包膜生物产生,防御机制和次级代谢产物的生物合成,转运和分解代谢等功能有关。以携带欧文斯氏弧菌、溶藻弧菌、假交替单胞菌等细菌的珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatu♂)为感染实验动物,开展哈维氏弧菌GDH11385的致病性和在宿主体内不同时空维度分布的研究,发现哈维氏弧菌为海南石斑鱼的主要致死性病原,且存在从肠道至脾脏到肝脏的侵染顺序。同时,针对上述比较基因组学确定的10个毒力(相关)基因,对感染哈维氏弧菌GDH11385的肝脏样品开展了实时荧光定量PCR检测,结果表明,编码Chemotaxis protein Che W、Alanine--t RNA ligase、Flavocytochrome C、Mannose-6-phosphate isomerase(class I)、Flagellin hook IN motif family protein、MATE family efflux transporter蛋白与编码一个功能未知蛋白的基因是哈维氏弧菌GDH11385菌株的关键毒力(相关)基因,编码4Fe-4S binding protein、Long-chain fatty acid--Co A ligase与Solute:sodium symporter family transporter是哈维氏弧菌GDH11385菌株的重要毒力(相关)基因。
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