蜂胶是西方蜜蜂从胶源植物的幼芽、树干裂缝处采集树胶,并混入蜂蜡、花粉及其上颚腺分泌物,咀嚼加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶的化学组成随着采集地植物来源、采集时间等的变化而变化,这也造成蜂胶抗氧化、抗菌等活性变化多样,给蜂胶的质量评价和品质控制带来困难,因此,探索新的分析方法较为全面地分析蜂胶的化学组成并对蜂胶中的抗氧化组分进行筛选和评价,可以为蜂胶的质量控制和蜂胶产品的开发利用奠定基础。首先,应用裂解气相色谱/质谱技术(Py-GC/MS)分析了中国蜂胶原胶的化学组成,比较了不同产地蜂胶原胶化学组成的差异。其次,分别测定了中国蜂胶总多酚、总黄酮、总二氢黄酮含量、17种单组分的含量及其离线总抗氧化活性,分析了蜂胶总抗氧化活性与组分含量之间的关系,筛选出蜂胶中的抗氧化组分。最后,建立优化了蜂胶HPLC-ABTS在线抗氧化活性测定方法,在线筛选出蜂胶的抗氧化组分,并对其活性大小进行评价,同时探讨了应用该在线方法区分蜂胶和杨树胶的可能性。结果如下:1.应用Py-GC/MS法首次成功分析了中国蜂胶原胶中的化学组分,得到了中国蜂胶原胶的Py-GC/MS谱图。最佳分析条件为:裂解温度550℃,蜂胶粒径120目,进样量0.1 mg,分流比50:1,色谱柱升温程序为:初始柱温40℃,以10℃/min升温到300℃,300℃保持10 min。不同产地蜂胶Py-GC/MS谱图差异较大,可以反应蜂胶原胶多类别化学组分的不同,山东蜂胶黄酮种类多、含量高。浙江舟山的蜂胶中检测到了较高含量的三萜,据悉,这在中国蜂胶中尚属首次。该方法不需要任何复杂的样品前处理,一次进样可以快速、同时完成蜂胶原胶中黄酮类、萜类、酸类、碳氢化合物、酚和醇、醛和酮、酯等多类别化学组分的定性、定量分析,为蜂胶的质量评价提供了新的参考方法。2.正交设计法优化了超声波辅助提取蜂胶黄酮的工艺,最佳参数为:超声功率59 KHz超声温度22±3℃时,超声提取4次,超声时间18 min,乙醇浓度65%,料液比1:28。蜂胶提取物中组分总含量(总多酚、总黄酮、总二氢黄酮含量)和单组分含量结果显示:与巴西蜂胶相比,中国蜂胶含有丰富的酚酸及其酯类、黄酮类组分,它们是咖啡酸、p-香豆酸、咖啡酸苯乙酯、p-香豆酸苄酯、短叶松素-3-乙酸酯、乔松素、白杨素、高良姜素、短叶松素等,其中山东、江苏等地蜂胶含量较高,浙江蜂胶含量较低。中国蜂胶的离线总抗氧化活性与组分总含量、单组分含量的相关性分析显示,中国蜂胶的总抗氧化活性与其总多酚、总黄酮的含量呈显著正相关,与总二氢黄酮的呈弱相关性;与咖啡酸、短叶松素、山奈酚、短叶松素-3-乙酸酯、白杨素、咖啡酸苯乙酯、高良姜素、咖啡酸肉桂酯、阿魏酸苄酯呈显著相关性,与阿魏酸和乔松素呈一定程度的相关性,与p-香豆酸、p-香豆酸苄酯的相关性不显著。3.优化了HPLC-ABTS在线抗氧化活性测定方法,柱后ABTS·+自由基反应系统的最佳反应条件为:自由基溶液引入流速为0.2 mL/min,反应环长度为4.5 m,在734 nm波长下检测自由基溶液,采用该波长下吸光度为0.750±0.025的自由基溶液,该方法重现性、稳定性好,灵敏度较高,适用于蜂胶中抗氧化组分的快速筛选和活性测定。应用HPLC-ABTS在线抗氧化活性测定方法建立了中国蜂胶的活性指纹谱图,筛选出10个共有的抗氧化组分,鉴定出6个,它们是咖啡酸、山奈酚、高良姜素、短叶松素-3-乙酸酯、咖啡酸苯乙酯、咖啡酸肉桂酯。从抗氧化活性贡献大小上看,咖啡酸、山奈酚和高良姜素对所有的中国蜂胶贡献都较大,短叶松素-3-乙酸酯、咖啡酸苯乙酯和咖啡酸肉桂酯对除了黑龙江、吉林和辽宁蜂胶以外的其他蜂胶贡献也较大。蜂胶在线总抗氧化活性与10个共有抗氧化组分的在线抗氧化活性的相关性分析显示:咖啡酸、山奈酚、短叶松素-3-乙酸酯、咖啡酸苯乙酯与蜂胶抗氧化活性显著正相关,相关系数都较大;高良姜素、咖啡酸酸肉桂酯与蜂胶抗氧化活性也显著正相关,相关系数较小,这六个组分可以作为蜂胶质量评价的指标组分。与离线法相比,在线法能更加高效、直观地筛选出蜂胶中的抗氧化活性组分,并能定量活性大小,对蜂胶进行质量评价和品质控制更有优势。