【摘 要】
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研究目的：DADS（Diallyl disulfide，DADS）是从大蒜中分离出的一种脂溶性单体有机硫化合物，可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期停滞等方式抑制多种肿瘤细胞的生长。DADS能
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研究目的：DADS（Diallyl disulfide，DADS）是从大蒜中分离出的一种脂溶性单体有机硫化合物，可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期停滞等方式抑制多种肿瘤细胞的生长。DADS能诱导HL-60细胞的分化和凋亡，导致HL-60细胞增殖周期阻滞在G2／M期。本试验分别用经DADS处理、无DADS处理的人白血病HL-60细胞的mRNA做为tester、driver，构建DADS诱导人白血病HL-60细胞G2／M期阻滞差异表达文库，试图从中分离出与G2／M期阻滞相关基因。用RACE克隆来源于DADS诱导人白血病HL-60细胞G2／M期阻滞差异表达文库的新EST的3’、5’端未知序列，为进一步研究其结构和功能打下基础。 方法：分别以DADS处理的HL-60细胞和未处理的人白血病HL-60细胞的mRNA做为tester和driver，用SSH构建DADS诱导人白血病HL-60细胞G2／M期阻滞差异表达cDNA文库。随机挑选正向阳性克隆，PCR检测插入片段，将含插入片段的克隆测序。Blastn分析差异cDNA片段的同源性。 用RT—PCR验证WT-1047在有无DADS处理时人白血病HL-60细胞中表达的差异性。获得的ESTs依据其高度保守序列设计用于扩增的寡聚核苷酸引物，用设计的3’引物和RACE试剂盒提供的5’共用引物，进行3’cDNA末端快速扩增，扩增产物克隆入pGEM-T Easy载体中，阳性克隆测序分析后，所得EST片段进行生物信息学分析。 结果：构建了DADS诱导人白血病HL-60细胞G2／M期阻滞差异表达cDNA文库，其中包含120个正向的阳性克隆和100个反向的阳性克隆。51个随机正向阳性克隆
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