β-1,3-葡聚糖酶(EC 3.2.1.39)是一类能够特异性水解p-1,3糖苷键的水解酶,广泛存在于微生物、植物和动物中。β-1,3-葡聚糖酶主要分布于海洋无脊椎动物中,该酶在生物体内的碳水化合物代谢过程中起着十分重要的作用,是海洋无脊椎动物重要的消化酶之一。本文以新鲜鲍鱼内脏为材料,经过匀浆、硫酸铵盐析沉淀、DEAE-52离子交换柱层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤等步骤,分离纯化出电泳纯的β-1,3-葡聚糖酶,并研究了部分酶学性质。分别采用苯甲基磺酰氟(PMSF),N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、二巯基苏糖醇(DTT)、琥珀酸酐(SUAN)、氯胺-T等化学修饰剂修饰鲍鱼内脏p-1,3-葡聚糖酶。最后应用薄层层析(TLC)分析了酶的水解产物。实验结果表明,新鲜鲍鱼内脏经0.1 mol/L pH6.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液匀浆破碎,浸提12h后,60%硫酸铵饱和度盐析,再经DEAE-52离子层析、Sephacryl S-200HR凝胶层析获得纯化的p-1,3-葡聚糖酶。纯化的鲍鱼内脏p-1,3-葡聚糖酶经Native-PAGE和SDS-PAGE鉴定皆得到一个条带,分子量约为28.5 kDa,酶的纯化倍数为最初的5.11,比活力为21.02 U/g。测得该酶的最适pH为5.0,pH在3.0～6.0之间该酶有较好的稳定性,温度在0℃-40℃时有很高的稳定性。Fe3’对该酶活性基本无影响,Ni’、Cu2’、Mg2’、Hg’对该酶活性有抑制作用。米氏常数Km为0.4034 mmol/L。纯化的鲍鱼内脏p-1,3-葡聚糖酶对昆布多糖有强的水解作用,酶活力为2.84 U。巯基抑制剂E-64对酶活力具有一定激活作用,野尻霉素对鲍鱼内脏p-1,3-葡聚糖酶有显著抑制作用,糖酶抑制剂D-葡萄糖醛酸-内脂、金属蛋白酶抑制剂EDTA对酶活影响不明显。N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和氯胺-T的修饰能显著抑制酶的活力,苯甲基磺酰氟(PMSF)、琥珀酸酐(SUAN)、二巯基苏糖醇(DTT)等对酶活力的影响与修饰剂的浓度有关。因此,推断色氨酸和甲硫氨酸可能是鲍鱼内脏p-1,3-葡聚糖酶必需功能基团。薄层层析(TLC)显示,鲍鱼内脏p-1,3-葡聚糖酶可充分水解昆布多糖得到二糖。