【摘 要】
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本文对兽药氯霉素的传统酶联免疫分析方法进行了改进,将生物素亲和素放大系统引入酶联免疫检测方法中,建立了氯霉素生物素放大酶联免疫(BA-ELISA)检测方法。对于间接BA-ELISA
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本文对兽药氯霉素的传统酶联免疫分析方法进行了改进,将生物素亲和素放大系统引入酶联免疫检测方法中,建立了氯霉素生物素放大酶联免疫(BA-ELISA)检测方法。对于间接BA-ELISA方法,经过反应条件的优化,方法灵敏度(IC50)为0.46±0.05μg/L,最低检测限(IC15)为0.05±0.01μg/L,板间变异及板内变异系数低于19.7%。对于直接BA-ELISA方法,首先制备出了高效的生物素化抗体,经反应条件的优化,方法灵敏度IC50为0.37±0.04μg/L,最低检测限(IC15)为0.03±0.006μg/L,板间变异及板内变异系数低于14.0%。对两种生物素方法从检测限、灵敏度、变异系数及检测所用时间等多方面进行比较,最终选择直接BA-ELISA方法用于实际样品的检测。进一步将所建立的直接BA-ELISA方法应用于动物源性食品,包括牛奶、猪肉和鱼肉样品中氯霉素残留的快速检测,对样品的前处理方法进行详细的考察和筛选,优化出基质干扰程度小、处理过程简单快速的方法。分别对氯霉素在三种实际样品中的添加回收率进行测定,回收率在86%-110%之间,可满足残留检测方法对检测灵敏度的要求,也可满足快速筛选的需要。采用液相色谱法对建立的氯霉素生物素放大酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值达0.9706,证明了所建立的直接BA-ELISA方法的准确度及可靠性。
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