Miro-Tom番茄高效遗传转化体系建立及转INH基因植株的获得

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Micro-Tom是一种矮化侏儒型番茄,它有许多较其他番茄品种体积小适于高密度种植、荧光灯照射即可生长和播种后生长快成熟期短的独特的特性,正因为这些类似于拟南芥的特性,成为了新的功能基因组研究模式植物。本研究在已构建载体P1300-2A11-INH并转化于农杆菌菌株EHA105的基础上,以Micro-Tom番茄为实验材料,通过比较培养基成分及外植体种类及处置方式构建了高效再生体系,并利用正交设计方法,对有关农杆菌介导的遗传转化的相关因素进行组合筛选分析。在此基础上获得了转INH基因的转化植株并进行相应的的鉴定。本研究为今后的Micro-Tom番茄遗传转化奠定基础,也为INH基因功能研究提供了宝贵的转基因材料。主要内容如下:1、通过比较不同激素组合对外植体再生发育的影响、以及外植体类型及其处置方式对其再生发育的影响优化了再生系建立的培养基激素比例,建立了Micro-Tom番茄高效再生体系。通过分析得到子叶是较下胚轴更好的转化外植体,子叶横切较纵切更利于外植体的再生。2、以高效再生体系为基础,利用正交设计方法设计实验组合,分析了不同农杆菌侵染浓度、侵染时间、共培养时间以及筛选抗生素(Carb)的浓度与外植体染菌率、坏死斑率、切口褐化率、死亡率、完好率的相关性,最后结合观察得到HygB筛选浓度24mg/L、菌液侵染浓度为OD600=0.5、侵染时间为5min、共培养时间1d、抑菌抗生素Carb浓度为500mg/L为最优的遗传转化体系。3、利用已建立的高效再生体系以及遗传转化体系,对Micro-Tom番茄进行INH基因的遗传转化,得到组培移栽成活的再生苗33株,通过PCR鉴定得到转化T0代19株,共10个株系,转化率为3.9%。T0代收种后再次播种23株,通过PCR鉴定22株阳性,阳性率为95.6%,可以看出转化基因遗传稳定。
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