目的金黄色葡萄球菌表面蛋白质与宿主感染密切相关，其中SdrE蛋白质为金黄色葡萄球菌表面蛋白质主要成员之一，在骨骼等感染中起重要作用，且在人等宿主中无同源蛋白质。因此，希望通过对金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE进行克隆表达纯化及晶体培养，以期解析其三维结构；并通过基因敲除和定点突变，以及相应的功能实验，深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制，为研发新型特异性抗金黄色葡萄球菌药物提供理论基础。方法利用PCR技术扩增SdrE基因，构建重组质粒pW28-SdrE，并在大肠杆菌（Escherichia coli, E.coli）B834中表达SdrE母体蛋白质和硒代蛋白质，通过Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化目的蛋白质，再用Hiload Superdex200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态，用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。运用X-ray衍射仪收集衍射数据，解析其三维结构。运用重叠延伸PCR和等位替换原理进行基因敲除和定点突变，在此基础上通过药敏试验了解SdrE与金黄色葡萄球菌耐药性的关系；Pull-down、SPR、ITC等生化实验验证SdrE与蛋白质相互作用位点；粘附和侵袭等细胞实验分析SdrE与金黄色葡萄球菌感染的关系；小鼠等实验动物研究进一步分析SdrE与金黄色葡萄球菌毒力的关系。结果构建了融合质粒pW28-SdrE，并在E.coli B834中可溶性表达。获得了纯度较高(95%)的SdrE母体蛋白质，该蛋白在溶液中以单体形式存在；同时表达纯化出纯度约为85%的SdrE硒代蛋白质。获得了SdrE母体蛋白质单晶和硒代蛋白质单晶，并在上海光源实验室收集到两套高分辨率的衍射数据。SdrE蛋白质晶体属于P222空间群，晶胞参数为a=45.19，b=66.35，c=146.22，其中，每一个晶体学不对称单位包含1个蛋白质分子，相应的结构解析工作正在进行。成功的构建了金黄色葡萄球菌SdrE基因缺失菌株，并通过细胞实验表明SdrE与金黄色葡萄球菌的侵袭能力密切相关。结论利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术，获得衍射能力较强的蛋白质单晶，其三维结构的解析正在进行，通过基因敲除和细胞实验验证了SdrE与金黄色葡萄球菌感染相关，为基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的理论基础。