采用表达谱芯片技术筛选肝癌肝肾阴虚证与其他证候差异基因的研究

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辨证论治是中医理论体系的核心内容,辨证的准确性是决定临床能否取得疗效的关键。“证”是机体在疾病发展过程中某一阶段的病理概括,反应该阶段病理变化的本质。既然同一个“证”具有共同的临床表现和病理基础,那必然有其共同的物质基础,而且很可能反应在基因和蛋白水平上。肾中所藏之精是禀受于父母的生殖之精,是构成胚胎发育的原始物质,与遗传物质具有一定的同一性。采用基因芯片检测技术探讨肾虚证的实质已经取得了一定的成果,如我们前期工作发现Bc1-2基因剔除小鼠的许多表现都与中医肾虚证非常相似,提出Bc1-2基因家族是中医肾虚物质基础的假说,并已经得到国内同行的广泛验证。   目的:   肝肾同居下焦,且五行学说属母子关系,在生理和病理上皆关系密切且相互影响,基于“肝肾同源”的理论,我们拟以原发性肝癌患者为例,采用表达谱芯片技术筛选肝肾阴虚症与其他证候的差异基因,尝试为证的客观化研究提供一种新的研究思路。   方法:   1、采用“病证结合”的方法,选择病情齐同的原发性肝癌患者纳入研究范围,通过中医辨证筛选出肝肾阴虚证患者50例和非肝肾阴虚证患者25例(包括气滞血瘀证5例、湿热证10例、肝郁脾虚证10例)。   2、收集患者外周血,分离淋巴细胞,提取RNA,检测后最终筛选肝肾阴虚证样本3例作为实验组,非肝肾阴虚证样本3例(其中气滞血瘀证、湿热证、肝郁脾虚证各1例)作为对照组进行芯片检测,利用经随机方差模型修正后的T-检验(RVM-T test)计算芯片探针的显著性水平(p-value)和误判率(FDR),初步筛选出肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证之间存在表达差异的基因。   3、使用Gene Ontology数据库对筛选出的差异基因进行GO注释,并对其进行分类分析。   结果:   1、肝肾阴虚证组与非肝肾阴虚证组相比,存在差异基因共876条,其中表达水平上调的有387条,表达水平下调的有489条。   2、将差异基因进行GO注释,发现差异基因的功能主要涉及免疫功能、代谢、自由基代谢等方面。   结论:   1、初步筛选出肝癌肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证相比存在的差异基因。   2、通过功能分析,发现肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证主要在免疫功能、代谢、自由基代谢等方面存在差异,细胞凋亡与肝肾阴虚证之间是否存在直接关系有待进一步探讨。
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