【摘 要】
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拟南芥(Arabidopsis)是重要的模式植物,广泛应用于实验室研究,研究拟南芥有关基因的耐逆境功能,对深入认识植物耐逆境机理以及基因的进一步利用具有重要意义。拟南芥热激因子HSF
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拟南芥(Arabidopsis)是重要的模式植物,广泛应用于实验室研究,研究拟南芥有关基因的耐逆境功能,对深入认识植物耐逆境机理以及基因的进一步利用具有重要意义。拟南芥热激因子HSFl是热激反应的主要调控因子,以往研究显示HSFl过量表达的转基因植株在高温逆境条件下(48℃)可正常生长,表现出耐高温逆境功能。本文构建了过量表达拟南芥热激因子HSFl的表达载体oB7WG2/At.HSFl,用农杆菌介导的方法转化拟南芥,得到了相应的HSFl过量表达的植株,研究了高温逆境条件下,拟南芥热激因子HSFl过量表达对延缓细胞凋亡过程的作用,并进一步研究了HSFl过量表达对提高植株耐酸、碱、H<,2>O<,2>逆境能力的作用。主要实验结果如下:
1.利用attB位点与attP位点特异性重组的方法构建了pDONR 201/At.HSFl供体载体,并经测序确定了有HSFl正确序列的克隆载体的E.coli转化子。
2.利用attL位点与attR位点特异性重组的方法构建含HSFl的表达载体oB7WG2/At.HSFl,筛选确定了含目的质粒的E.coli转化子。
3.通过三亲杂交方法,将上一步得到的质粒转化农杆菌LBA4404,验证并得到了阳性转化子。
4.用上述得到的农杆菌转化拟南芥,筛选得到HSFl过量表达的植株。
5.将得到的转基因植株和非转基因拟南芥植株在高温条件下细胞死亡过程进行对比,发现HSFl过量表达的植株细胞核固缩过程明显推迟。
6.将转基因植株和非转基因植株同时置于酸、碱、H<,2>O<,2>三种逆境中,发现HSFl过量表达的转基因植株在种子发芽能力以及小苗存活力方面明显强于非转基因植株,显示HSFl除耐高温逆境外,亦具有耐酸、碱、H<,2>O<,2>逆境功能。
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