目的研究蛋白激酶Wee1在小鼠1-细胞期受精卵各个细胞时期的表达水平,应用酵母双杂交技术筛选出与Wee1蛋白激酶相互作用的候选分子,进而验证转录因子jun B与蛋白激酶Wee1的相互作用,为进一步研究Wee1对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制奠定基础。方法1、Real-time PCR检测Wee1 m RNA在小鼠1-细胞期受精卵各时期的表达,Western Blot检测Wee1蛋白在小鼠1-细胞期受精卵各时期的表达。2、利用分子克隆的方法重组酵母双杂交质粒p GBKT7-Wee1,并验证其在酵母中的毒性、自激活能力和表达。3、利用酵母双杂交技术从人卵巢c DNA文库中筛选出与Wee1蛋白相互作用的蛋白,并在酵母中重新验证其相互作用。4、利用免疫共沉淀方法验证jun B与Wee1在哺乳动物细胞中的相互作用。结果1、蛋白激酶Wee1的m RNA和蛋白表达水平随小鼠1-细胞期受精卵细胞周期的进程而变化,在M期表达明显下降。2、成功构建p GBKT7-Wee1诱饵质粒,验证了诱饵质粒无毒性及自激活能力,且诱饵质粒可以在酵母中表达,可进一步进行酵母双杂交的筛选工作。3、酵母双杂交系统已经完成,共筛选出30个与蛋白激酶Wee1相互作用的蛋白,并验证了这些蛋白与Wee1在酵母中的相互作用。4、免疫共沉淀证实转录因子jun B与蛋白激酶Wee1在细胞内存在相互作用。结论利用酵母双杂交系统筛选出与Wee1相互作用的候选分子30个;其中转录因子jun B与蛋白激酶Wee1存在相互作用;而Wee1在小鼠1-细胞期受精卵中动态表达,提示蛋白激酶Wee1可能通过与转录因子jun B相互作用进而调控小鼠受精卵早期发育。