猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病已经引起世界各国的高度重视,相关研究也不断展开,但是它的致病机理还不是很清楚。目前的一些研究发现PRRSV感染过程中存在抗体依赖性增强作用现象,亚中和剂量抗体能通过与靶细胞表面的Fc受体结合而增强病毒的感染,这可能与病毒的致病性相关。本试验用PRRSV Hn/06毒株接种Marc-145细胞,待出现病变后收集病毒液,滴鼻感染20日龄健康仔猪,10mL/头,感染后第11天、21天、31天分别用含弗氏不完全佐剂的纯化浓缩病毒抗原加强免疫,5mL/头,感染后45天采血制备免疫血清,经ELISA方法检测,抗体效价为1:12800,结果表明成功制备了猪抗PRRSV免疫血清。用硫酸铵盐析法粗提健康猪IgG,经DEAE-纤维素离子交换层析柱纯化,将纯化猪IgG免疫兔子,制备兔抗猪免疫血清,经琼脂扩散试验测定,抗体效价为1:64。用同样的方法粗提并纯化兔抗猪IgG后,测蛋白含量,浓缩后用低温袋内标记方法标记FITC荧光素,在PBS液中透析4h后经葡聚糖凝胶层析柱去除游离的FITC分子,紫外分光光度计测定标记后的兔抗猪荧光二抗,浓度为6.99mg/mL。在24孔细胞培养板上培养Marc-145细胞,待其长到75%以上单层时接种PRRSV,培养48h后,用70%冷丙酮溶液固定,PBS液洗涤,将猪抗PRRSV阳性血清做一抗,分别作100、200、400、800、1600和3200倍稀释,用FITC标记的兔抗猪IgG做二抗,分别作10、20、30、40和50倍稀释,同时设阴性血清对照。按照方阵法确定一抗和二抗的最佳工作浓度分别为1:800和1:20。结果表明成功建立了可检测PRRSV的间接免疫荧光方法(IFA)。将猪抗PRRSV免疫血清做1:2、1:4、1:8、1:16、1:32不同稀释度,分别与等体积的200 TCID50的PRRSV病毒液作用1h后接种猪肺巨噬细胞(PAM),培养48h后用IFA检测PAM中PRRSV,测定免疫血清的中和效价为1:4。本试验将1:8、1:16、1:32三个稀释度的亚中和剂量免疫血清与等体积的200 TCID50的PRRSV病毒液作用1 h,制成不同浓度的抗体与病毒的复合物,然后和等体积的10倍稀释的豚鼠血清作用1h后接种PAM细胞,培养48 h后用IFA检测PAM细胞中PRRSV;同时将不同浓度的亚中和剂量抗体与病毒的复合物分别与等体积的10倍稀释的兔抗猪IgG作用1h后接种PAM细胞,培养48h后用IFA检测PAM细胞中PRRSV,用PRRSV感染PAM细胞试验作阳性对照。结果显示,在补体受体阻断和Fc受体阻断试验中,均没有出现和感染对照试验一样的荧光,说明补体和兔抗猪IgG成功阻断了亚中和剂量抗体与病毒的复合物进入PAM细胞。在24孔细胞培养板上培养PAM细胞,24 h后分别将鼠抗猪FcγRⅡB受体胞外区血清、鼠抗FcγRⅢ受体胞外区血清及其混合血清加入PAM细胞,封闭1 h后接种不同浓度的亚中和剂量抗体与病毒的复合物,培养60h后用IFA和RT-PCR方法分别检测PAM中的PRRSV。同时用健康鼠血清封闭PAM细胞作阴性对照,用PRRSV感染PAM细胞作阳性对照。结果显示,鼠抗猪FcγRⅡB胞外区血清均能阻断1:8、1:16和1:32稀释的三个亚中和剂量抗体与病毒的复合物进入PAM细胞,而鼠抗FcγRⅢ胞外区血清只能够阻断1:8稀释的亚中和剂量的抗体与病毒的复合物进入PAM细胞,两种抗Fc受体胞外区的混合血清则能够阻断1:8、1:16稀释的亚中和剂量抗体与病毒的复合物进入PAM细胞。受体封闭试验结果初步说明,在PRRSV感染过程中,抗原抗体免疫复合物与PRRSV同时存在时,则抗原抗体免疫复合物可以协助PRRSV进入PAM细胞。